Analýza slín na kortizol in vitro. „Voľný kortizol (sliny). Výkon je možný na biomateriáloch

Plazmatický polčas kortizolu (60-90 minút) závisí od stupňa jeho väzby na proteíny a rýchlosti metabolizmu.

Plazmatické väzbové proteíny

Po uvoľnení do krvi sa kortizol a androgény nadobličiek viažu na plazmatické proteíny. Kortizol interaguje prevažne s globulínom viažucim kortikosteroidy (CSG alebo transkortín) a v menšej miere s albumínom, zatiaľ čo androgény interagujú prevažne s albumínom. Viazané steroidy sú biologicky neaktívne. Aktívna je iba ich neviazaná alebo slobodná frakcia. Plazmatické proteíny chránia kortizol pred rozkladom a vyhladzujú prudké výkyvy jeho hladiny počas epizodického uvoľňovania z nadobličiek. V slinách nie sú žiadne väzbové proteíny, a preto hladina kortizolu v nich odráža koncentráciu jeho voľnej formy v krvi.

Voľný a viazaný kortizol

Za bazálnych podmienok tvorí voľný kortizol v plazme asi 10 %, CSH viazaný asi 75 % a zvyšok sa viaže na albumín. Koncentrácia voľného kortizolu v plazme je približne 1 μg% a hladina tohto biologicky aktívneho hormónu je regulovaná ACTH.

Kortikosteroid viažuci globulín (CBG)
CSG (molekulová hmotnosť asi 50 000) sa produkuje v pečeni a má vysokú afinitu ku kortizolu. CSG obsiahnutý v 100 ml plazmy viaže približne 25 mikrogramov kortizolu. Keď celková koncentrácia kortizolu v plazme prekročí túto hladinu, koncentrácia jeho voľnej formy sa rýchlo zvýši. Iné endogénne steroidy zvyčajne neovplyvňujú väzbu kortizolu na CSH. Výnimkou je progesterón neskoršie dátumy tehotenstva, kedy môže obsadiť až 25 % väzbových miest CSG. Syntetické steroidy (s výnimkou prednizolónu) sa prakticky neviažu na CSG. Estrogény zvyšujú plazmatické hladiny CSH (ako sa pozoruje pri tehotenstve alebo pri perorálnych kontraceptívach). Jeho koncentrácia sa zvyšuje aj pri hypertyreóze, cukrovke, niektorých krvných ochoreniach alebo v dôsledku genetických príčin. Pokles hladín CSH je charakteristický pre jeho rodinnú deficienciu, hypotyreózu a nedostatok bielkovín (závažné ochorenie pečene alebo nefrotický syndróm).

Albumín
Kapacita albumínu pre kortizol je oveľa vyššia, ale afinita je nižšia. Normálne albumín viaže asi 15 % kortizolu prítomného v krvi, ale keď celková koncentrácia kortizolu prekročí väzbovú kapacitu CSH, podiel kortizolu naviazaného na albumín sa zvýši. Albumín aktívne viaže syntetické glukokortikoidy (napríklad približne 75 % plazmatického dexametazónu sa viaže na albumín).

Androgénna väzba
Androstendión, DHEA a DHEA sulfát cirkulujú v krvi, pričom sú voľne viazané na albumín. Testosterón interaguje s vysokou afinitou k inému globulínu viažucemu pohlavné hormóny (SHBG).

Laboratórne ukazovatele

Existujú špecifické metódy na stanovenie kortizolu a androgénov nadobličiek v plazme. Činnosť kôry nadobličiek sa dá posúdiť aj podľa hladiny steroidov v moči (najmä podľa denného vylučovania kortizolu). Užitočná informácia určuje koncentráciu ACTH v plazme. Výsledky stanovenia celkovej hladiny steroidných hormónov v plazme závisia od koncentrácie väzbových proteínov. Okrem toho, keďže plazmatické koncentrácie ACTH a hormónov nadobličiek počas dňa výrazne kolíšu, výsledky jednotlivých stanovení sú veľmi nespoľahlivé. Na získanie spoľahlivejších diagnostických informácií sa zvyčajne používajú dynamické testy (stimulácia alebo supresia), ako aj ukazovatele rýchlosti sekrécie kortizolu.

Plazmatická koncentrácia ACTH

Metódy stanovenia
Koncentrácia ACTH v plazme je veľmi presným indikátorom stavu hypofýzno-nadobličkového systému. Pri stanovení citlivou imunometrickou metódou sa bežne pohybuje v rozmedzí 9-52 pg/ml (2-11,1 pmol/l).

Výklad
Stanovenie hladiny ACTH v plazme sa najčastejšie vykonáva na určenie lokalizácie primárnej príčiny dysfunkcie nadobličiek.

1. Pri primárnej adrenálnej insuficiencii je hladina ACTH zvýšená a pri patológii hypofýzy a sekundárnej adrenálnej insuficiencii je jeho hladina „normálna“ alebo nedosahuje 10 pg / ml (2,2 pmol / l).
2. Pri Cushingovom syndróme spôsobenom nádorom nadobličiek produkujúcim kortizol, diagnostická hodnota má pokles plazmatických hladín ACTH pod 5 pg / ml (1,1 pmol / l), zatiaľ čo pri Cushingovej chorobe (hypersekrécia ACTH) je jeho plazmatická hladina normálna alebo zvýšená.
3. Plazmatické hladiny ACTH sú zvyčajne dramaticky zvýšené pri syndróme ektopickej sekrécie ACTH, hoci rovnako významné zvýšenie sa vyskytuje pri Cushingovej chorobe. Okrem toho pri použití imunorádiometrickej metódy s dvojitými protilátkami (IRMA) je koncentrácia ACTH v zriedkavých prípadoch tohto syndrómu zvýšená v menšej miere, pretože táto metóda nezisťuje vysokomolekulárne prekurzory ACTH.
4. Plazmatické hladiny ACTH sú tiež prudko zvýšené u pacientov s pokročilými formami vrodenej adrenálnej hyperplázie, čo sa používa na diagnostiku týchto porúch a sledovanie ich liečby.

Plazmatická koncentrácia kortizolu

Metódy stanovenia
Hladiny kortizolu v plazme sa najčastejšie stanovujú rádioimunoanalýzou (RIA) alebo vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC). Tieto metódy stanovujú celkový kortizol (viazaný a voľný) v plazme. Sliny obsahujú iba voľný kortizol a analýza slín umožňuje jednoduché a spoľahlivé posúdenie koncentrácie voľnej formy tohto hormónu.
Princípom RIA je inhibícia väzby značeného kortizolu na protilátky kortizolom prítomným vo vzorke plazmy. Citlivosť moderné metódy RIA umožňuje použitie malých objemov plazmy. Okrem toho v súčasnosti používané antiséra majú malú alebo žiadnu interakciu s inými endogénnymi steroidmi, a preto výsledky RIA presne odrážajú obsah celkového plazmatického kortizolu. Použité protilátky môžu skrížene reagovať s niektorými syntetickými glukokortikoidmi (napr. prednizónom), ale s inými bežne používanými lieky neovplyvňujú výsledky takýchto stanovení.

Výklad
Jednorazové merania plazmatickej koncentrácie kortizolu nie sú diagnostické, pretože kortizol sa vylučuje epizodicky a navyše sa jeho hladina zvyšuje pri akomkoľvek strese. Spoľahlivejšie informácie sa získajú dynamickým testovaním stavu systému HGN.

1. Normálne skóre. Normálne hladiny kortizolu v plazme závisia od spôsobu stanovenia. Podľa RIA sa obsah kortizolu o 8. hodine ráno pohybuje od 3 do 20 µg% (80-550 nmol/l), v priemere 10-12 µg% (275,9-331,1 nmol/l). V neskorších hodinách tieto hodnoty klesajú a o 16:00 sú približne dvakrát nižšie ako ráno. Medzi 22:00 a 2:00 je koncentrácia kortizolu zvyčajne nižšia ako 3 μg% (80 nmol/l). Hladina kortizolu v slinách o polnoci je pod 0,15 µg% (4 nmol/l).
2. úrovne počas stresu. Sekrécia kortizolu sa zvyšuje s rôzne choroby, na čas chirurgické zákroky a pri traume. Za týchto podmienok môže plazmatická koncentrácia kortizolu dosiahnuť 40-60 µg% (1100-1655 nmol/l).
3. Zvýšená koncentrácia estrogénu. Plazmatické hladiny celkového kortizolu sa zvyšujú so zvýšením väzbovej kapacity CSH, čo sa najčastejšie vyskytuje pri stavoch vysokých hladín estrogénov v krvi (napríklad počas tehotenstva alebo pri užívaní exogénnych estrogénov alebo perorálnych kontraceptív). Koncentrácia kortizolu v takýchto prípadoch môže byť 2-3 krát vyššia ako normálne.
4. Iné štáty. Obsah CSG sa môže zmeniť za iných podmienok. Koncentrácia celkového kortizolu sa zvyšuje pri úzkosti a depresii, hladovaní, mentálnej anorexii, alkoholizme a chronickom zlyhaní obličiek.

Kortizol v slinách v neskorých nočných hodinách

U väčšiny pacientov s Cushingovým syndrómom je narušený denný rytmus sekrécie kortizolu a jeho hladina (na rozdiel od normy) neklesá o 11-12 hod. To môže narušiť spánok a spôsobiť psychické problémy. Zvýšená hladina kortizolu v plazme o polnoci (u spiacich ľudí) odlišuje Cushingov syndróm nielen od normy, ale aj od stavov, akými sú depresia alebo alkoholizmus. V jednej štúdii polnočná koncentrácia kortizolu v sére vyššia ako 5,2 μg % (140 nmol/l) umožňuje diagnózu Cushingovho syndrómu so 100 % senzitivitou a 77 % špecifickosťou. Takéto definície sú však ťažké a mnohí lekári radšej diagnostikujú Cushingov syndróm podľa hladiny kortizolu v slinách v noci. Obsah kortizolu v slinách je v rovnováhe s hladinou voľného kortizolu v krvi, nezávisí od množstva slín a zostáva stabilný niekoľko dní.
S pomocou rôznych zariadení sa sliny ľahko zbierajú doma. Nedávne štúdie to ukázali zvýšená hladina slinný kortizol v noci je spoľahlivým znakom Cushingovho syndrómu. Citlivosť a špecifickosť tohto indikátora presahuje 90% a takéto definície môžu byť najjednoduchšie a najbežnejšie efektívnym spôsobom skríning pacientov s podozrením na hyperkortizolémiu. Referenčné hodnoty koncentrácie kortizolu v slinách závisia od spôsobu stanovenia.

(modul direct4)

kortikosteroidy v moči

voľný kortizol

1. Metódy definície. Stanovenie voľného vylučovania kortizolu močom je spoľahlivým spôsobom diagnostiky Cushingovho syndrómu. Normálne je voľný kortizol v moči menej ako 1% secernovaného hormónu. Ak sa však kortizol vylučuje nadmerne, koncentrácie kortizolu prevyšujú väzbovú kapacitu CSH a zvyšujú sa plazmatické hladiny voľného hormónu a jeho vylučovanie močom. Obsah voľného kortizolu sa stanovuje vo vzorkách denného moču pomocou HPLC, RIA a novšie pomocou plynovej chromatografie/hmotnostnej spektroskopie.
2. Normálne skóre. V súčasnosti najviac špecifická metóda stanovenie kortizolu v moči je HPLC. Normálna hladina voľného kortizolu stanovená touto metódou sa pohybuje od 5 do 50 mcg (14-135 nmol) denne. Pri použití metód RIA je normálny obsah kortizolu v moči 20-90 mcg (50-250 nmol) denne.
3. Diagnostická hodnota. Analýza moču odlišuje jednoduchú obezitu od Cushingovho syndrómu, keďže obsah voľného kortizolu v moči (na rozdiel od 17-hydroxykortikosteroidov) sa s obezitou nezvyšuje. Hladiny kortizolu v moči stúpajú za rovnakých podmienok ako plazmatické hladiny a môžu sa mierne zvýšiť počas tehotenstva. Pri adrenálnej insuficiencii sa tento spôsob hodnotenia sekrécie kortizolu nepoužíva jednak z dôvodu nízkej citlivosti metód, jednak preto, že nízka exkrécia kortizolu je charakteristická pre mnohé zdravých ľudí.

17-Hydroxykortikosteroidy
Stanovenie vylučovania týchto zlúčenín močom v súčasnosti stratilo svoju hodnotu, pretože bolo možné určiť hladiny plazmatického kortizolu a voľného kortizolu v moči.

Supresívne testy s dexametazónom

Test s nízkou dávkou
Pomocou tohto testu môžete odmietnuť alebo potvrdiť diagnózu Cushingovho syndrómu bez ohľadu na jeho príčinu. Normálne dexametazón ako aktívny glukokortikoid potláča hypofýzovú sekréciu ACTH, čo vedie k poklesu hladiny glukokortikoidov v plazme a moči. Tým sa kontroluje bezpečnosť mechanizmu spätnej väzby v systéme HGN. Pri Cushingovom syndróme je tento mechanizmus narušený a sekrécia steroidov pri podávaní dexametazónu neklesá. Dexametazón v použitých dávkach neinterferuje so stanovením kortizolu v plazme a moči.
Na skríning pacientov s Cushingovým syndrómom sa zvyčajne vykonáva nočný test s 1 mg dexametazónu. Dexametazón sa podáva perorálne o 23:00 a plazmatické hladiny kortizolu sa merajú nasledujúce ráno. Ak je jeho hladina pod 1,8 mg% (50 nmol / l), potom je Cushingov syndróm s najväčšou pravdepodobnosťou vylúčený. Ak hladina kortizolu presiahne 10 mg% (276 nmol / l), potom (ak neexistujú dôvody na falošne pozitívne výsledky vzorky) to naznačuje prítomnosť tohto syndrómu. V týchto prípadoch by mala byť diagnóza potvrdená inými prostriedkami. Hladiny kortizolu medzi 1,8 a 10 µg% nie sú informatívne.
Porušenie reakcie na dexametazón sa zistí u 80-99% pacientov s Cushingovým syndrómom. Falošne negatívne výsledky tohto testu sú častejšie pri miernej hyperkortizolémii, ako aj v prípadoch pomalého metabolizmu dexametazónu, keď je jeho plazmatická hladina vyššia, ako sa očakávalo. V takýchto prípadoch sa súčasne stanovuje obsah dexametazónu a kortizolu v plazme.
Falošne pozitívne výsledky sa vyskytujú u hospitalizovaných pacientov a tých s chronickou resp akútne ochorenia, ako aj s depresívnymi a úzkostnými stavmi, alkoholizmom, vysokou hladinou estrogénu a urémiou. U pacientov užívajúcich fenytoín, barbituráty a iné lieky, ktoré indukujú syntézu pečeňových mikrozomálnych enzýmov, sa dexametazón môže rozložiť rýchlejšie a nedosiahne koncentráciu potrebnú na zníženie hladín ACTH.

Vzorky s vysokou dávkou
Takéto testy sa vykonávajú s cieľom odlíšiť Cushingovu chorobu (hypersekrécia ACTH hypofýzou) od syndrómu ektopickej sekrécie ACTH a nádorov nadobličiek, pretože v prvom prípade môžu superfyziologické dávky dexametazónu stále potláčať sekréciu ACTH a kortizolu , zatiaľ čo pri nádoroch nadobličiek a vo väčšine prípadov k ektopickej sekrécii ACTH nedochádza. Žiaľ, veľmi často sa dodržiavajú výnimky z tohto pravidla, čo si vyžaduje veľkú opatrnosť pri interpretácii výsledkov takýchto testov.

1. Krátka štúdia s vysokou dávkou dexametazónu. Predbežne stanovte počiatočnú rannú koncentráciu kortizolu v plazme. O 23:00 sa perorálne podáva dexametazón 8 mg a plazmatické hladiny kortizolu sa stanovia o 20:00 nasledujúce ráno. Pri Cushingovej chorobe je plazmatická koncentrácia kortizolu spravidla polovičná ako počiatočná a pri syndróme ektopickej sekrécie ACTH sa buď neznižuje, alebo klesá v oveľa menšom rozsahu. Plazmatická koncentrácia kortizolu sa neznižuje u nádorov nadobličiek, ktoré autonómne vylučujú kortizol. V týchto prípadoch je sekrécia ACTH spočiatku potlačená vysokými hladinami endogénneho kortizolu a účinok dexametazónu sa neprejavuje.
2. Dlhá štúdia s vysokou dávkou dexametazónu. Dexametazón sa užíva perorálne 2 mg každých 6 hodín počas 2 dní. Pred a na druhý deň po začatí užívania dexametazónu sa denne zbiera moč. Pri Cushingovej chorobe je vylučovanie kortizolu močom znížené o viac ako 50 %, zatiaľ čo pri nádoroch nadobličiek alebo ektopickej sekrécii ACTH zostáva takmer na počiatočnej úrovni. U niektorých pacientov so syndrómom ektopickej sekrécie ACTH však vysoké dávky dexametazónu stále znižujú vylučovanie kortizolu a v niektorých prípadoch Cushingovej choroby je vylučovanie tohto hormónu znížené v oveľa menšej miere. Diagnostická senzitivita, špecifickosť a presnosť výsledkov tohto testu je len asi 80 %. Jeho špecifickosť a presnosť možno zvýšiť tým, že sa nezameriame na vylučovanie kortizolu, ale na iné kritériá. Je však čoraz jasnejšie, že vysokodávkový dexametazónový test spoľahlivo nerozlišuje medzi hypofyzárnou a nehypofyzárnou hypersekréciou ACTH, bez ohľadu na kritériá hodnotenia jeho výsledkov.

Zásoby hypofýzy a nadobličiek

Stanovenie zásob hypofýzy a nadobličiek slúži na posúdenie schopnosti HPA systému reagovať na stres. Na tento účel ACTH (ktorý priamo stimuluje sekréciu kortikosteroidov), metyrapón (ktorý inhibuje syntézu kortizolu, a tým stimuluje sekréciu ACTH) alebo inzulín (ktorý tým, že spôsobuje hypoglykémiu, stimuluje sekréciu CRH a teda ACTH) , sú podávané. Nedávno sa CRH použil na priamu stimuláciu sekrécie ACTH hypofyzárnymi kortikotrofmi.

Vzorky s ACTH

1. Metóda a normálne ukazovatele. Na diagnostiku primárnej aj sekundárnej nedostatočnosti nadobličiek sa vykonáva krátky test s ACTH, ktorý umožňuje vyhodnotiť akútnu reakciu nadobličiek na stimuláciu. Používa sa syntetický a 1-24 ľudský ACTH (tetrakosaktid alebo kosyntropín). Pôst pred testom je voliteľný a možno ho vykonať kedykoľvek počas dňa. Po definovaní základná línia kortizolu intramuskulárne alebo intravenózne podaného 0,25 mg tetrakosaktidu a stanoviť obsah kortizolu v plazme 30 alebo 60 minút po injekcii. Keďže maximálna koncentrácia ACTH počas testu presahuje 10 000 pg/ml, výsledky tohto testu odrážajú maximálnu sekrečnú kapacitu kôry nadobličiek. Maximálny vzostup hladín kortizolu po 30-60 minútach by mal presiahnuť 18-20 μg% (497-552 nmol / l). Tento vzostup v 30. minúte je konštantný a nezávisí od bazálnej koncentrácie kortizolu. Navyše nezáleží na tom, či sa ACTH podáva v dávke 250, 5 alebo dokonca 1 mcg. Nárast hladín kortizolu v reakcii na zavedenie 1 μg ACTH je citlivejším indikátorom funkcie kôry nadobličiek a umožňuje rozlíšiť medzi pacientmi dlhodobo liečenými kortikosteroidmi tých pacientov, u ktorých je odpoveď na 250 μg ACTH je normálny, ale je oslabený o 1 μg. 1 μg ACTH test je lepšie tolerovaný a zdá sa byť metódou voľby pri podozrení na nedostatočnosť nadobličiek. Nemenej informatívne môže byť aj stanovenie kortizolu v slinách po podaní ACTH.
2. Znížená odozva. Slabá odpoveď nadobličiek na akútnu stimuláciu potvrdzuje diagnózu adrenálnej insuficiencie. o primárna nedostatočnosť sekrécia kortizolu v kôre nadobličiek je znížená a sekrécia ACTH je zvýšená. Preto sú nadobličky spočiatku maximálne stimulované a zavedenie exogénneho ACTH nezvyšuje sekréciu kortizolu. Inými slovami, v tomto prípade dochádza k poklesu sekrečných rezerv nadobličiek. Pri sekundárnej adrenálnej insuficiencii (v dôsledku nedostatku ACTH) sa fascikulárne a retikulárne zóny kôra atrofia a prakticky nereagujú na akútnu ACTH stimuláciu. Pri primárnej aj sekundárnej adrenálnej insuficiencii ich oslabená odpoveď na akútnu stimuláciu ACTH predpovedá oslabenú odpoveď na inzulínovú hypoglykémiu, metyrapón a chirurgický stres.
3. Normálna reakcia. Normálna odpoveď na akútnu stimuláciu ACTH vylučuje tak primárnu adrenálnu insuficienciu (pretože indikuje zachovanie sekrečnej rezervy týchto žliaz), ako aj zjavnú sekundárnu adrenálnu insuficienciu (v dôsledku ich atrofie). Normálna odpoveď však nevylučuje čiastočný deficit ACTH (zníženie rezervy hypofýzy), pretože bazálna sekrécia tohto tropického hormónu môže byť dostatočná na zabránenie atrofii nadobličiek, ale nebude sa zvyšovať so stresom. V takýchto prípadoch sú indikované testy s metyrapónom, inzulínová hypoglykémia alebo CRH.

Test s metyrapónom
Metyrapónový test sa používa na diagnostiku adrenálnej insuficiencie a na posúdenie hypofýzno-nadobličkových rezerv. Metyrapón blokuje syntézu kortizolu inhibíciou llp-hydroxylázy, ktorá premieňa 11-deoxykortizol na kortizol. To stimuluje sekréciu ACTH, čo následne zvyšuje sekréciu 11-deoxykortizolu a plazmatické hladiny. Pri podozrení na deficit hypofyzárneho ACTH sa zvyčajne používa krátky dexametazónový test. Podozrenie na primárnu nedostatočnosť nadobličiek je najlepšie testovať krátkym ACTH testom. Normálne by pri nočnom teste s metyrapónom mala hladina 11-deoxykortizolu v plazme prekročiť 7 ng% (0,2 nmol / l) a koncentrácia ACTH by mala byť 100 pg / ml (22 pmol / l). Znížená odpoveď naznačuje nedostatočnosť kôry nadobličiek. Normálna odpoveď na metyrapón predpovedá normálnu odpoveď na stres a inzulínovú hypoglykémiu.

Test inzulínovej hypoglykémie
Stres spôsobený hypoglykémiou je sprevádzaný uvoľňovaním CRH, čo vedie k zvýšeniu sekrécie ACTH a kortizolu. Tento test teda hodnotí funkčnú integritu systému HPA a jeho schopnosť reagovať na stres. Normálne by zvýšenie hladín kortizolu v plazme malo presiahnuť 8 µg% (220 nmol/l) a jeho maximálna koncentrácia by mala byť 18-20 µg% (497-552 nmol/l). Plazmatické hladiny ACTH sa typicky zvyšujú o viac ako 100 pg/ml (22 pmol/l) ako odpoveď na hypoglykémiu. Normálna odpoveď kortizolu vylučuje nedostatočnosť nadobličiek a znížené rezervy ACTH hypofýzy. To znamená, že ľudia s normálnou reakciou na hypoglykémiu nepotrebujú dodatočný kortizol počas choroby alebo operácie.

Ukážka s KRG
ACTH odpoveď na CRH je zvýšená pri primárnej adrenálnej insuficiencii a chýba pri hypopituitarizme. Pri patologických procesoch v hypotalame môže byť táto reakcia oneskorená. Na určenie príčiny Cushingovho syndrómu sa vykonáva aj test s CRH.

androgény
Sekrécia androgénov sa zvyčajne hodnotí podľa ich bazálnej hladiny, pretože supresívne a stimulačné testy sú v tomto prípade menej informatívne ako pri porušení sekrécie glukokortikoidov. Existujú metódy na stanovenie DHEA, DHEA sulfátu, androstendiónu, testosterónu a dihydrotestosterónu. Hladina voľného testosterónu v plazme priamo odráža jeho biologickú aktivitu, ale komerčné súpravy na jeho stanovenie nedávajú vždy dostatočne presné výsledky.

Voľný kortizol (sliny)

Kortizol je steroidný hormón syntetizovaný vo fascikulárnej zóne kôry nadobličiek zo spoločného prekurzora cholesterolu pod kontrolou ACTH. Interakcia v systéme "hypotalamus - hypofýza - nadobličky" sa uskutočňuje podľa klasického princípu negatívnej spätnej väzby. ACTH zvyšuje sekréciu kortizolu, zvýšená hladina kortizolu blokuje sekréciu ACTH. Kôra nadobličiek vylučuje kortizol vo voľnej forme, vstupuje do krvného obehu, kortizol sa viaže na plazmatické proteíny, viac ako 90 % kortizolu sa viaže na špecifický transportný proteín – transkortín (CRG) a v malom množstve na albumín. V viazaný stav kortizol stráca svoju biologickú aktivitu a iba voľný kortizol poskytuje svoj účinok na cieľové tkanivá. Metabolizuje sa v pečeni, filtruje sa v obličkových glomerulách a vylučuje sa močom vo voľnej forme. Polčas rozpadu je 80-100 minút. Kortizol hrá dôležitá úloha v metabolizme glukózy, udržiavanie cievny tonus, regulácia imunitnej odpovede a v reakcii organizmu na stres.

Koncentrácia ACTH a kortizolu v plazme má jasný denný rytmus: vrchol koncentrácie ACTH sa pozoruje medzi 4. a 6. hodinou ráno, maximálna hladina kortizolu je o 8. hodine ráno, minimum je večer (23 hodín).

U zdravých ľudí je rozdiel medzi koncentráciou kortizolu ráno a popoludní 50% a medzi ránom a večerom - 350%.

Sekrécia kortizolu sa vekom mení len málo. Denný rytmus ACTH a sekrécie kortizolu sa u detí vytvára vo veku 6-12 mesiacov a je jasne stanovený až po 3 rokoch. U starších detí a dospelých je individuálny denný rytmus ACTH a sekrécie kortizolu celkom stabilný a mení sa pri zmene časového pásma až po 15-20 dňoch.

Stanovenie voľného biologicky aktívneho kortizolu v slinách

Bunková membrána (bariéra) slinných žliaz neumožňuje biologickým molekulám s MW > 400 Da vstúpiť do slinných kanálikov. Molekulová hmotnosť všetkých steroidov< 400 Да, и в результате только свободные формы стероидов проникают в слюнной проток (кортизол, тестостерон, эстрадиол и др.), а гормоны, связанные с альбумином или глобулинами, транспортными белками стероидов, не проникают.

Hladina kortizolu v slinách nezávisí od objemu a rýchlosti jeho uvoľňovania, čo má zásadný význam pri interpretácii výsledkov.

Pri syndróme endogénneho hyperkortizolizmu je narušený cirkadiánny rytmus sekrécie kortizolu a pacienti s Itsenko-Cushingovým syndrómom majú večer vysokú hladinu plazmatického hormónu, ktorá koreluje s hladinou hormónu v slinách. Preto je stanovenie slinného kortizolu o 23:00 pohodlným a účinným skríningovým testom u pacientov s podozrením na endogénny hyperkortizolizmus. Citlivosť - 92-100%, špecifickosť - 93-100%. Odporúča sa dvojité určenie. Normálne hladiny kortizolu v slinách po 23-24 hodinách nepresahujú 145 ng/dl (4 nmol/l).

Je možné sledovať terapiu adrenálnej insuficiencie derivátmi hydrokortizónu.

Indikátor

Charakteristický

Analyzátor a test- systém

EUROIMMUN (Nemecko)

Referenčné hodnoty, ng/ml
deti: do 4 dní života: do 0,95; 4-6 dní života: 1,3-3,02; 6-8 dní života: 2,07-5,05; 8-10 dní života: 1,04-4,78; 10-12 dní života: 0,49-1,83; 12-14 dní života: 0,46-1,26; 14-16 dní života: 0,55-1,23; 16-18 dní života: 0,13-1,15; 18-20 dní života: 0,03-1,15; 20-22 dní života: 0,18-0,72; 22-24 dní života: 0,06-0,96.
Dospelí: 0,2-4,4

Kortizol (sliny)

1. Celý názov štúdie:

Kortizol (sliny)

Kortizol (sliny)

Marker porušení regulačnej funkcie hypofýzy, indikátor funkcie nadobličiek.

2. Názov sekcie:

Hormonálne štúdie

3. Kód výskumu v cenníku :

1200

Cena - viď

4. Metóda výskumu, analyzátor:

Prepojený imunosorbentový test:

• Automatický analyzátor enzýmovej imunoanalýzy Lazurite "DynexTechnologiesLTD",, (USA) - analytická citlivosť: 0,035 - 45 ng / ml

5. Jednotky merania a prevodné faktory:

• ng/ml

6. Typ biomateriálu:

Sliny

7. Typ skúmavky/nádoby na biomateriál:

Špeciálna nádoba "SarstedtCortisol-Salivette"

8. Popis štúdie:

Kortizol je steroidný hormón, hlavný predstaviteľ glukokortikoidných hormónov, syntetizovaný vo fascikulárnej zóne kôry nadobličiek zo spoločného prekurzora cholesterolu pod kontrolou hypofýzového ACTH a hormónu uvoľňujúceho kortikotropín z hypotalamu (nepriamo cez ACTH). Interakcia v systéme "hypotalamus - hypofýza - nadobličky" sa uskutočňuje podľa klasického princípu negatívnej spätnej väzby. V krvnom obehu sa kortizol viaže na plazmatické proteíny: viac ako 75 % kortizolu sa viaže na špecifický transportný proteín, transkortín (CSG), syntetizovaný v pečeni, 15 % na albumín. Asi 10 % cirkulujúceho kortizolu je vo voľnej forme a práve tá poskytuje účinok na cieľové tkanivá.

Glukokortikoidy priamo alebo nepriamo regulujú takmer všetky fyziologické a bmochemické procesy, receptory pre ne sa nachádzajú vo všetkých tkanivách tela. Zohrávajú kľúčovú úlohu v reakciách organizmu na stresové situácie, udržiavajú cievny tonus a regulujú imunitnú odpoveď. Kortizol ovplyvňuje metabolizmus sacharidov – zvyšuje koncentráciu glukózy v krvi zvýšením jej syntézy v pečeni a znížením jej využitia na periférii (je to antagonista inzulínu). Vplyv hormónu na metabolizmus lipidov vedie k inhibícii syntézy a zvýšenému rozkladu tukov s uvoľňovaním glycerolu a mastných kyselín, k zvýšeniu hladiny cholesterolu v krvi a akumulácii ketolátok. Existuje tiež katabolický účinok kortizolu na metabolizmus bielkovín. Kortizol má malú mineralokortikoidnú aktivitu. Kortizol má silný protizápalový účinok. Inhibuje takmer všetky štádiá zápalový proces inhibuje migráciu fagocytov do poškodených tkanív a uvoľňovanie zápalových cytokínov, znižuje syntézu prostaglandínov a stabilizuje membrány lyzozómov.

Kortizol sa metabolizuje v pečeni, filtruje sa v glomerulách a vylučuje sa močom vo voľnej forme. Polčas rozpadu je 80-100 minút. Sliny obsahujú voľný, stabilný kortizol, ktorého hladina je nezávislá od obsahu globulínu viažuceho kortizol. Hladinu kortizolu v slinách neovplyvňuje objem a rýchlosť slinenia, čo má zásadný význam pri interpretácii výsledkov.

Čo sa týka obsahu kortizolu v krvi, kortizol v slinách sa vyznačuje aj denným rytmom sekrécie. U zdravých ľudí je obsah kortizolu maximálny ráno (6.00-8.00) a 2-5x nižší večer (22.00-24.00). Denný rytmus uvoľňovania kortizolu je narušený u pacientok s Cushingovým syndrómom, počas tehotenstva, pod vplyvom stresu – fyzického alebo psychického. Takže pacienti s Itsenko-Cushingovým syndrómom majú vysokú hladinu plazmatického hormónu vo večerných hodinách, čo koreluje s hladinou hormónu v slinách. Preto je stanovenie slinného kortizolu o 23:00 pohodlným a účinným skríningovým testom u pacientov s podozrením na endogénny hyperkortizolizmus.

9. Referenčné hodnoty normy :

• Noc: 0,035 - 1,0 ng/ml
• Ranný vrchol (1,5 hodiny po prebudení): 0,9 – 11,5 ng/ml
• 3,5 – 4,5 hodiny po rannom vrchole: 0,28 – 5,8 ng/ml
• 7,5-8,5 hodín po rannom vrchole: 0,18 - 3,0 ng/ml

10. Indikácie na vymenovanie:

• diagnostika Itsenko-Cushingovho syndrómu/choroby (obezita, arteriálna hypertenzia, hyperglykémia, myopatia, hirsutizmus, plétora, osteoporóza, patologické zlomeniny, červené strie, zvýšená traumatizácia kože a mäkkých tkanív, poruchy menštruačný cyklus)
• Diagnóza Addisonovej choroby
• atypické klinické príznaky pre vek pacienta (osteoporóza, arteriálna hypertenzia)
• deti so zakrpatenosťou, nadváhou, predčasnou pubertou
• odlišná diagnóza primárnej a sekundárnej adrenálnej insuficiencie v spoločnej štúdii s ACTH

11. Interpretácia výsledkov:

Zvýšiť úroveň:

Itsenko-Cushingova choroba/syndróm, nodulárna adrenálna hyperplázia, ektopický syndróm CRH (hormón uvoľňujúci kortikotropín), ektopický syndróm ACTH, syndróm polycystických ovárií (PCOS), hypertyreóza, hypoglykémia, obezita, depresia, cirhóza pečene (znížený katabolizmus), nekompenzovaný cukrovka, alkoholizmus, tehotenstvo.

Downgrade:

hypopituitarizmus, Addisonova choroba, stav po užití glukokortikoidov, adrenogenitálny syndróm, hypotyreózny stav (znížená sekrécia), hepatocelulárna insuficiencia - znížená sekrécia (cirhóza pečene, hepatitída), náhla strata hmotnosti

12. Faktory na zvýšenie úrovne:

Mikrokrvácajúce žuvačky, žuvací tabak, sladké drievko, syntetické glukokortikosteroidy (perorálne, parenterálne, inhalačné, lokálne), antikonvulzíva, aspirín, atropín, benzodiazepíny, klomipramín, perorálne kontraceptíva, furosemid, inzulín, interferón (gama), metoxamín, naloxamín, ranoxidín spironolaktón, opiáty, vazopresín, ACTH, alkohol

13. Faktory na zníženie úrovne:

Barbituráty, dexametazón, efedrín, indometacín, ketokonazol, labetalol, levodopa, morfín, nifedipín, oxazepam, pravastatín, rifampicín, syntetické kortikosteroidy (prednizolón, metylprednizolón)

14. Termín:

3 pracovné dni

15. Pravidlá prípravy:

cm. « »

Vlastnosti: v predvečer štúdie je potrebné vylúčiť fyzické cvičenie(športový tréning), pitie alkoholu, sladkého drievka, nefajčiť, pred odberom biomateriálu potrebuje pacient na hodinu úplný fyzický a emocionálny odpočinok.

v "Research Handbook"

Depresia skracuje život, a to nielen zo samovraždy. Depresia zvyšuje riziko rakoviny a srdcovo-cievne ochorenia (www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12377293) (www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17640152)

Neurotická depresia vzniká v dôsledku dlhodobého chronického stresu. Neberte si toho príliš veľa. Dlhotrvajúci stres prechádza do depresie. Depresia nie je znakom slabosti – je to znak toho, že ste sa príliš dlho snažili byť silní. Jedným z markerov chronického stresu je slinný kortizol.

V dôsledku toho môže stúpať aj kortizol chronický zápal. Zápal napodobňuje stres. Viď obrázok vľavo. Zápal zvyšuje faktor/hormón uvoľňujúci kortikotropín (CRF/ CRH), ako aj arginín vazopresín (AVP). CRF a AVP zvyšujú syntézu adrenokortikotropného hormónu (ACTH resp ACTH), ktorý vyvoláva uvoľnenie kortizolu z kôry nadobličiek, čím sa aktivuje centrál nervový systém- stres. Ak stres trvá dlhší čas, potom nastáva trápenie – depresia, nespavosť atď. "Mechanizmy depresie vyvolanej cytokínmi zahŕňajú indukciu extrahypotalamického faktora uvoľňujúceho kortikotropín (CRF) a arginín vazopresínu (AVP)" www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25825158
Zápal spôsobuje zníženie citlivosti na kortizol, čo spôsobuje zvýšenie jeho hladiny "vývoj rezistencie na glukokortikoidy" ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25825158

Na zistenie hladiny kortizolu je najpraktickejšie urobiť si test zo slín. Každodenná analýza moču je nepraktická a jej odber je nepohodlný. Raz urobený krvný test nie je vôbec správny – kortizol môže prudko stúpať aj od vzrušenia pred odberom krvi. Rozbor kortizolu zo slín však tiež nie je správny, ak sa robí len raz, napríklad ráno alebo večer. Pretože ľudia majú rôzne cirkadiánne rytmy a rôzne časy na zvýšenie kortizolu "Avšak vzhľadom na cirkadiánny rytmus kortizolu sú tieto štúdie pravdepodobne nepresné a je potrebný presnejší odhad expozície kortizolu" www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6349003 Metaanalýza ukázala, že referenčné intervaly pre ranný slinný kortizol u pacientov s depresiou (0 – 29 nmol/l) au kontrol (1 – 23 nmol/l) sú prakticky rovnaké – vykazujú významné prekrytie. "Referenčné intervaly pre ranný slinný kortizol u depresívnych pacientov (0-29 nmol/l) a kontrolných osôb (1-23 nmol/l) vykazovali podstatné prekrytie, čo naznačuje nedostatok rozlišovacej schopnosti." Akoby neexistovali dôkazy o rozdiele v kortizole slinných žliaz u depresívnych "Na základe dostupných štúdií neexistujú spoľahlivé dôkazy o rozdieloch v slinnom kortizole u pacientov s depresiou a kontrolných osôb a slinný kortizol nie je schopný rozlíšiť medzi osobami bez depresie a bez nej." ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447770

Jedna vzorka kortizolu je teda zlým meraním kortizolu, najmä ak sa odoberie skoro ráno alebo pred spaním. Kortizol v slinách by sa mal merať aspoň 3x denne – každých 8 hodín. Potom bude takéto meranie presne odrážať skutočnosť denný kortizol berúc do úvahy všetky výkyvy. "Skúmaním frekvencie odberu vzoriek sérového kortizolu sme preukázali, že jedna vzorka kortizolu je slabým meradlom AUC kortizolu, najmä ak sa odoberie v čase prebúdzania alebo spánku." ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6349003 Netestujte kortizol bezprostredne po športovom aeróbnom tréningu www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10190775 ak po tréningu nebolo jedlo www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23415825
Pôst alebo FMD zvyšuje kortizol – v tomto čase kortizol netestujte.

Ako znížiť hladinu kortizolu?

Okrem toho, že kortizol stúpa v dôsledku zápalu, ktorý je potrebné liečiť, existujú aj ďalšie faktory.

V roku 2018 metaanalýza randomizovaných kontrolovaných štúdií zistila, že meditácia všímavosti môže byť účinná pri liečbe závažnej depresívnej poruchy. "Meditatívne pohyby môžu byť účinnými intervenciami na zmiernenie symptómov MDD" "Vzhľadom na skutočnosť, že meditačné pohyby sú bezpečné a ľahko dostupné, lekári môžu zvážiť odporúčanie meditačných pohybov pre pacientov s MDD."
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30071662

2018 randomizovaná kontrolovaná štúdia zistila, že meditácia všímavosti sa znížila kortizolu na 26% (od 497,3 do 392,3 ng / ml) atď. www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30256277

Skrátenie času spánku z 8 na 4 hodiny zvyšuje kortizol do večera nasledujúceho dňa37% www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9415946

Nadmerná intoxikácia (1 diel vodky, 2 diely nealko) zvýšila hladinu kortizolu u subjektov o233.13% www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23252809

Horčík znižuje kortizol po aeróbnom cvičeníwww.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6527092 www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9794094

Muzikoterapia znižuje slinný kortizol počas kolonoskopie.
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15086180

Masáž pri depresii alebo strese zvyšuje hladinu serotonínu v moči o 28 %, dopamínu o 31 % a znižuje kortizol v slinách alebo moči v priemere o 31% .
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16162447

V randomizovanej kontrolovanej štúdii pri chronickom strese 300 mg extraktu z koreňa ashwagandha znížilo kortizol o 20% « Po 60 dňoch liečby sa v skupine s Ashwagandhou pozorovalo zníženie o 27,9 % oproti východiskovej hodnote. Naproti tomu v skupine s placebom sa pozorovalo zníženie o 7,9 %. Rozdiel v znížení hladín kortizolu v sére v dvoch skupinách na 60. deň bol štatisticky významný (P=0,002)“
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23439798

Autor článku nestarenieRU -