Cette méthode utilise le phénomène de luminescence.
L'essence du phénomène de luminescence réside dans le fait que lors de l'absorption diverses sortesénergie (lumière, électrique, etc.) par les molécules de certaines substances, leurs atomes passent dans un état excité, puis, revenant à leur état d'origine, ils libèrent l'énergie absorbée sous forme de rayonnement lumineux.
Dans RIF, la luminescence se manifeste sous forme de fluorescence - c'est une lueur qui se produit au moment de l'irradiation avec une lumière excitante et s'arrête immédiatement après sa fin.
De nombreuses substances et micro-organismes vivants ont leur propre fluorescence (dite primaire), mais son intensité est très faible. Les substances qui ont une fluorescence primaire intense et qui sont utilisées pour conférer des propriétés fluorescentes à des substances non fluorescentes sont appelées fluorochromes. Une telle fluorescence induite est dite secondaire.
Pour exciter la fluorescence en microscopie à fluorescence, la partie ultraviolette ou bleu-violet du spectre (longueur d'onde 300-460 nm) est le plus souvent utilisée. À ces fins, les laboratoires disposent de microscopes luminescents de différents modèles - ML-1-ML-4, "Lumam".
En pratique virologique, deux principales méthodes de microscopie à fluorescence sont utilisées : la fluorochromisation et les anticorps fluorescents (ou RIF).
Fluorochromisation- c'est le traitement des préparations au fluorochrome afin d'augmenter l'intensité et le contraste de leur luminescence. Le plus intéressant est le fluorochrome acridine orange, qui provoque une fluorescence polychromatique. acides nucléiques. Ainsi, lorsque les préparations sont traitées avec ce fluorochrome, l'acide désoxyribonucléique émet une fluorescence vive en vert et l'acide ribonucléique - rouge rubis.
La méthode RIF consiste dans le fait que des anticorps liés à un fluorochrome conservent la capacité d'entrer dans une relation spécifique avec un antigène homologue. Le complexe antigène + anticorps résultant, dû à la présence de fluorochrome dans celui-ci, est détecté au microscope à fluorescence par une lueur caractéristique.
Pour obtenir des anticorps, on utilise des sérums hyperimmuns hautement actifs, à partir desquels des anticorps sont isolés et marqués au fluorochrome. Les fluorochromes les plus couramment utilisés sont l'isothiocyanate de fluorescéine FITC (lumière verte) et le sulfochlorure de rhodamine PCX (lumière rouge). Un anticorps marqué avec un fluorochrome est appelé un conjugué.
La méthode de préparation et de coloration des préparations est la suivante :
- préparer des frottis, des empreintes d'organes ou sur des lamelles - une culture de cellules infectées sur des lames de verre; Les histosections peuvent également être utilisées ;
- les préparations sont séchées à l'air et fixées dans de l'acétone réfrigérée à température ambiante ou à moins 15 °C (de 15 minutes à 4-16 heures) ;
- coloré par méthode directe ou indirecte ; tenir des registres sous un microscope à fluorescence selon l'intensité de la lueur, estimée en croix.
En parallèle, préparer et colorer des préparations issues d'un animal sain - contrôle.
Il existe deux méthodes principales d'application d'anticorps fluorescents : directe et indirecte.
Méthode directe (étape unique). Un conjugué (sérum fluorescent au virus suspecté) est appliqué sur la préparation fixée, incubée 30 minutes à une température de 37°C en chambre humide. Ensuite, le médicament est lavé du conjugué non lié avec une solution saline (pH 7,2 - 7,5), séché à l'air, une huile non fluorescente est appliquée et examinée au microscope.
La méthode directe permet la détection et l'identification de l'antigène. Pour ce faire, vous devez disposer d'un sérum fluorescent pour chaque virus.
Méthode indirecte (en deux étapes). Un sérum non marqué contenant des anticorps contre le virus suspecté est appliqué sur la préparation fixée, incubée pendant 30 minutes à 37 °C, les anticorps non liés sont lavés. Un sérum anti-espèce fluorescent est appliqué sur la préparation, correspondant au type d'animal qui produit des anticorps antiviraux homologues, et incubé pendant 30 minutes à 37 °C. Ensuite, le médicament est lavé des anticorps marqués non liés, séché à l'air, une huile non fluorescente est appliquée et examinée au microscope à fluorescence.
Les sérums anti-espèces sont obtenus en immunisant des animaux avec des globulines de ces espèces qui servent de producteurs d'anticorps anti-viraux. Ainsi, si des anticorps antiviraux ont été obtenus sur des lapins, un sérum anti-lapin fluorescent est utilisé.
La méthode indirecte permet non seulement de détecter et d'identifier l'antigène, mais également de détecter et de déterminer le titre d'anticorps. De plus, cette méthode permet de détecter des antigènes de différents virus avec un seul sérum marqué, puisqu'elle est basée sur l'utilisation de sérums anti-espèces. Les sérums anti-lapin, anti-bovin, anti-cheval et contre les globulines de cobaye sont plus couramment utilisés.
Plusieurs modifications de la méthode indirecte ont été développées. La méthode utilisant le complément mérite la plus grande attention. La méthode consiste à appliquer sur la préparation fixée du sérum spécifique non fluorescent inactivé et du complément de cobaye, à la maintenir 30 minutes à 37 °C, à la laver et à détecter le complexe antigène + anticorps + complément en appliquant du sérum anti-complémentaire fluorescent , maintenu pendant 30 minutes à 37 °C , lavé, séché à l'air et examiné au microscope à fluorescence.
Avantages RIF : spécificité et sensibilité élevées ; facilité de technique de réglage; nécessite un nombre minimum de composants. Il s'agit d'une méthode de diagnostic express, car vous pouvez obtenir une réponse en quelques heures. Les inconvénients comprennent la subjectivité dans l'évaluation de l'intensité de la luminescence et, malheureusement, des sérums fluorescents sont parfois Mauvaise qualité. Actuellement, le RIF est largement utilisé dans le diagnostic des maladies animales virales.
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La méthode d'immunofluorescence (RIF, réaction d'immunofluorescence, réaction de Koons) est une méthode de détection d'antigènes spécifiques utilisant des anticorps conjugués au fluorochrome. Il a une sensibilité et une spécificité élevées.
Il est utilisé pour le diagnostic express des maladies infectieuses (identification de l'agent pathogène dans le matériel de test), ainsi que pour la détermination des anticorps et des récepteurs de surface et des marqueurs des leucocytes (immunophénotypage) et d'autres cellules.
La détection d'antigènes bactériens et viraux dans du matériel infectieux, des tissus animaux et des cultures cellulaires à l'aide d'anticorps fluorescents (sérums) est largement utilisée dans la pratique du diagnostic. La préparation de sérums fluorescents repose sur la capacité de certains fluorochromes (par exemple, l'isothiocyanate de fluorescéine) à entrer en liaison chimique avec des protéines sériques sans violer leur spécificité immunologique.
Il existe trois types de méthode : directe, indirecte, avec complément. La méthode RIF directe est basée sur le fait que des antigènes tissulaires ou des microbes traités avec des sérums immuns avec des anticorps marqués avec des fluorochromes sont capables de briller dans les rayons UV d'un microscope à fluorescence. Les bactéries dans un frottis, traitées avec un tel sérum luminescent, brillent le long de la périphérie cellulaire sous la forme d'une bordure verte.
La méthode RIF indirecte consiste à identifier le complexe antigène-anticorps à l'aide d'un sérum antiglobuline (anti-anticorps) marqué au fluorochrome. Pour ce faire, les frottis d'une suspension de microbes sont traités avec des anticorps de sérum de diagnostic antimicrobien de lapin. Ensuite, les anticorps qui ne sont pas liés aux antigènes microbiens sont lavés et les anticorps restant sur les microbes sont détectés en traitant le frottis avec du sérum antiglobuline (anti-lapin) marqué avec des fluorochromes. Il en résulte la formation d'un complexe microbe + anticorps antimicrobiens de lapin + anticorps anti-lapin marqués au fluorochrome. Ce complexe est observé au microscope à fluorescence, comme dans la méthode directe.
Mécanisme. Sur une lame de verre, un frottis est préparé à partir du matériel d'essai, fixé sur une flamme et traité avec du sérum de lapin immun contenant des anticorps contre les antigènes pathogènes. Pour former un complexe antigène-anticorps, la préparation est placée dans une chambre humide et incubée à 37 °C pendant 15 minutes, après quoi elle est soigneusement lavée avec une solution isotonique de chlorure de sodium pour éliminer les anticorps non liés à l'antigène. Ensuite, un sérum antiglobuline fluorescent contre les globulines de lapin est appliqué sur la préparation, incubée 15 minutes à 37°C, puis la préparation est soigneusement lavée avec une solution isotonique de chlorure de sodium. À la suite de la liaison du sérum antiglobuline fluorescent avec des anticorps spécifiques fixés sur l'antigène, des complexes antigène-anticorps lumineux se forment, qui sont détectés par microscopie fluorescente.
4. 75 mt/m3 de streptocoques, 12 mt/m3 de staphylocoques et 1 mt/m3 de bactéries de la tuberculose ont été trouvés dans l'air de la chambre des enfants de la crèche. Donnez une évaluation sanitaire et bactériologique de l'air et esquissez un plan pour son assainissement.
BILLET D'EXAMEN N° _54
Rétrovirus. Infection par le VIH (SIDA) et ses agents pathogènes.
Le virus de l'immunodéficience humaine provoque l'infection par le VIH, entraînant le développement du syndrome d'immunodéficience acquise.
L'agent causal de l'infection par le VIH est un virus lymphotrope appartenant à la famille des Retroviridae du genre Lentivirus.
Propriétés morphologiques : virus contenant de l'ARN. Particule virale de forme sphérique L'enveloppe est constituée d'une double couche de lipides pénétrés par des glycoprotéines. L'enveloppe lipidique provient de la membrane plasmique de la cellule hôte dans laquelle le virus se reproduit. La molécule de glycoprotéine est constituée de 2 sous-unités situées à la surface du virion et pénétrant son enveloppe lipidique.
Le noyau du virus est en forme de cône et se compose de protéines de capside, d'un certain nombre de protéines de matrice et de protéines de protéase. Le génome forme deux brins d'ARN, pour la mise en œuvre du processus de reproduction, le VIH possède une transcriptase inverse, ou reversetase.
Le génome du virus est constitué de 3 principaux gènes structuraux et de 7 gènes régulateurs et fonctionnels. Les gènes fonctionnels remplissent des fonctions régulatrices et assurent la mise en œuvre des processus de reproduction et la participation du virus au processus infectieux.
Le virus affecte principalement les lymphocytes T et B, certaines cellules de la série monocytaire (macrophages, leucocytes), les cellules système nerveux.
Propriétés culturales : sur culture cellulaire de lymphocytes T et de monocytes humains (en présence d'IL-2).
Structure antigénique: 2 types de virus - VIH-1 et VIH-2 VIH-1, a plus de 10 génotypes (sous-types): A, B, C, D, E, F ..., différant par la composition en acides aminés de protéines.
Le VIH-1 est divisé en 3 groupes : M, N, O. La plupart des isolats appartiennent au groupe M, dans lequel on distingue 10 sous-types : A, B, C, D, Fl, F-2, G, H, I, K. Résistance : Sensible aux facteurs physiques et chimiques, périt lorsqu'il est chauffé. Le virus peut persister longtemps à l'état séché, dans du sang séché.
Facteurs de pathogénicité, pathogenèse : Le virus se fixe sur le lymphocyte, pénètre dans la cellule et se reproduit dans le lymphocyte. Suite à la reproduction du VIH dans un lymphocyte, ce dernier est détruit ou perd ses propriétés fonctionnelles. À la suite de la reproduction du virus dans diverses cellules, il s'accumule dans les organes et les tissus et se retrouve dans le sang, la lymphe, la salive, l'urine, la sueur et les matières fécales.
Dans l'infection par le VIH, le nombre de lymphocytes T-4 diminue, la fonction des lymphocytes B est altérée, la fonction de tueur naturel est supprimée et la réponse aux antigènes est réduite et la production de complément, de lymphokines et d'autres facteurs qui régulent les fonctions immunitaires (IL) est perturbé, entraînant un dysfonctionnement des systèmes immunitaires.
Clinique : touchée système respiratoire(pneumonie, bronchite); SNC (abcès, méningite); Tractus gastro-intestinal (diarrhée), se produire Néoplasmes malins(tumeurs les organes internes).
L'infection par le VIH se déroule en plusieurs étapes : 1) période d'incubation en moyenne 2 à 4 semaines ; 2) le stade des manifestations primaires, caractérisé initialement par une fièvre aiguë, une diarrhée ; le stade se termine par une phase asymptomatique et la persistance du virus, la restauration du bien-être, cependant, des anticorps anti-VIH sont détectés dans le sang, 3) le stade des maladies secondaires, se manifestant par des lésions du système nerveux respiratoire. L'infection par le VIH se termine avec la dernière, 4ème étape terminale - le SIDA.
Diagnostic microbiologique.
Virologique et études sérologiques comprennent des méthodes de détermination des antigènes et des anticorps du VIH. Pour cela, ELISA, IB et PCR sont utilisés. Les sérums des patients infectés par le VIH-1 et le VIH-2 contiennent des anticorps contre toutes les protéines virales. Cependant, pour confirmer le diagnostic, les anticorps contre les protéines gp41, gpl20, gpl60, p24 du VIH-1 et les anticorps contre les protéines gp36, gpl05, gpl40 du VIH-2 sont déterminés. Les anticorps anti-VIH apparaissent 2 à 4 semaines après l'infection et sont détectables à tous les stades du VIH.
Méthode de détection du virus dans le sang, les lymphocytes. Cependant, avec tout échantillon positif, une réaction IB est mise en place pour confirmer les résultats. La PCR est également utilisée, qui peut détecter l'infection par le VIH pendant l'incubation et la période clinique précoce, mais sa sensibilité est légèrement inférieure à celle de l'ELISA.
Les diagnostics cliniques et sérologiques sont confirmés études immunologiques s'ils indiquent la présence d'un déficit immunitaire chez le patient examiné.
Système de test de diagnostic ELISA pour détecter les anticorps anti-VIH - comprend l'antigène viral adsorbé sur un support, les anticorps contre l'Ig humaine. Utilisé pour le sérodiagnostic du SIDA.
Traitement : utilisation d'inhibiteurs de la transcriptase inverse agissant sur les cellules activées. Les médicaments sont des dérivés de la thymidine - azidothymidine et phosphazide.
La prévention. Spécifique - non.
Influence des facteurs physiques et chimiques sur les microbes. La mutation et son importance pour la médecine pratique. Exemples. La valeur de l'écologie.
Action des facteurs chimiques et biologiques.
Action des produits chimiques
Les produits chimiques peuvent inhiber ou inhiber complètement la croissance des micro-organismes. Si un produit chimique inhibe la croissance des bactéries, mais après son élimination, leur croissance reprend.
Agents antimicrobiens, en tenant compte structure chimique et le mécanisme de leur action bactéricide sur les bactéries peut être divisé dans les groupes suivants : agents oxydants, halogènes, composés métalliques, acides et alcalis, surfaces- substances actives, alcools, colorants, dérivés du phénol et du formaldéhyde.
Oxydants. Ce groupe comprend le peroxyde d'hydrogène et le permanganate de potassium.
Halogènes. Chlore, iode et leurs préparations : eau de Javel, chloramine B, pantocide, solution alcoolique iodée 5 %, iodinol, iodoforme.
Composés de métaux lourds (sels de plomb, cuivre, zinc, argent, mercure ; composés organométalliques d'argent : protargol, collargol). Ces composés sont capables d'avoir des effets locaux à la fois antimicrobiens et divers sur les tissus du macro-organisme.
Acides et alcalis. L'action bactéricide des acides et des alcalis est basée sur la déshydratation des micro-organismes, les modifications du pH du milieu nutritif, l'hydrolyse des systèmes colloïdaux et la formation d'albuminates acides ou alcalins.
Les colorants ont des propriétés pour inhiber la croissance des bactéries. Ils agissent lentement mais de manière plus sélective.
Le formaldéhyde est un gaz incolore. En pratique, une solution aqueuse à 40 % de formaldéhyde (formol) est utilisée. Le formaldéhyde gazeux et dissous dans l'eau a un effet néfaste sur les formes végétatives et sporulées des bactéries.
Action des facteurs biologiques
L'action des facteurs biologiques se manifeste principalement dans l'antagonisme des microbes, lorsque les déchets de certains microbes provoquent la mort d'autres.
Antibiotiques (du grec anti - contre, bios - vie) - substances biologiquement actives formées au cours de la vie des champignons, bactéries, animaux, plantes et créées synthétiquement, capables de supprimer et de tuer sélectivement les micro-organismes, les champignons, les rickettsies, les gros virus, les protozoaires et helminthes individuels.
3. La réaction de l'activité biologique des enzymes bactériennes dans les rhumatismes, l'importance diagnostique et pratique, le rôle protecteur des anticorps contre les enzymes dans l'immunité acquise (détermination de l'antihyaluronidase et de l'anti O-streptolysine).
Rhumatisme - maladie courante nature infectieuse-allergique, dans laquelle le tissu conjonctif est affecté, principalement du système cardio-vasculaire, ainsi que les articulations, les organes internes, le système nerveux central. On pense que la cause du développement des rhumatismes est l'activation de micro-organismes pathogènes, principalement le streptocoque bêta-hémolytique du groupe A. le rôle principal dans l'étiologie et la pathogenèse des maladies rhumatismales. Premièrement, la maladie se développe dans le contexte infection streptococcique. Deuxièmement, un grand nombre d'anticorps contre les micro-organismes de ce groupe se trouvent dans le sang des patients. Troisièmement, la prévention de la maladie est réalisée avec succès avec des médicaments antibactériens.
À la polyarthrite rhumatoïde les membranes synoviales, pour des raisons inconnues, sécrètent de grandes quantités de l'enzyme glucose-6-phosphate déshydrogénase, qui décompose également les liaisons disulfure dans la membrane cellulaire. Dans ce cas, il y a une "fuite" d'enzymes protéolytiques des lysosomes cellulaires, qui endommagent les os et le cartilage voisins. Le corps réagit en produisant des cytokines, qui comprennent également le facteur de nécrose tumorale α TNF-α. Des cascades de réactions dans les cellules, qui sont déclenchées par des cytokines, exacerbent encore les symptômes de la maladie. L'inflammation rhumatoïde chronique associée au TNF-α provoque très souvent des lésions cartilagineuses et articulaires entraînant une incapacité physique.
Découverte en 1942 par Koons, la réaction d'immunofluorescence n'est pas une nouvelle méthode de recherche. Cependant, l'avènement des technologies d'hybridomes, qui ont permis d'obtenir des anticorps monoclonaux, ont donné une "seconde vie" à cette réaction, puisque leur utilisation a permis de multiplier par plusieurs la sensibilité de cette réaction et sa spécificité.
Et aujourd'hui, nous vous expliquerons en détail la réaction de l'immunofluorescence directe et indirecte (RIF) en tant que méthode de diagnostic de Koons pour les hommes et les femmes adultes pendant la grossesse.
Qu'est-ce qu'une réaction d'immunofluorescence
Représentant une excellente opportunité d'obtenir rapidement diagnostic précis, la réaction d'immunofluorescence vous permet de déterminer la présence de l'agent pathogène dans le matériel pathologique. Pour cela, un frottis est utilisé à partir d'un matériau spécialement traité avec du FITC marqué (isothiocyanate de fluorescéine) et étudié comme une analyse hétérogène.
Pour obtenir le résultat, un microscope à fluorescence est utilisé, dans son système optique il y a un ensemble de filtres de lumière pour fournir à la préparation une lumière bleu-violet ou ultraviolette ayant une longueur d'onde donnée. Cette condition permet au fluorochrome de briller dans une plage donnée. Le chercheur évalue les propriétés de la lueur, sa nature, la taille des objets et leur position relative.
A qui est-il attribué
La réalisation d'une réaction d'immunofluorescence peut être prescrite dans le diagnostic de nombreuses maladies virales. En particulier, il est prescrit pour un examen complet d'identifier les facteurs suivants:
- la présence d'un virus dans le corps;
- infection à salmonelle;
- l'existence de certains antigènes dans le corps;
- la probabilité d'infection du corps par la chlamydia, les mycoplasmes et d'autres micro-organismes capables de déclencher des maladies virales humaines est révélée;
- diagnostic des maladies virales chez les animaux.
Les indications listées autorisent l'utilisation de la réaction d'immunofluorescence lorsqu'elle est détectée chez l'homme et l'animal. maladies virales nature différente.
Objectifs de la
Étant donné que cette méthode de diagnostic présente de nombreux avantages, parmi lesquels sa grande efficacité, sa rapidité de mise en œuvre et d'obtention des résultats, ainsi que le manque de un grand nombre contre-indications, il est utilisé pour déterminer la présence dans le corps infections virales. Par conséquent, cette analyse peut être prescrite à la fois pour établir et pour clarifier le diagnostic, sur la base duquel un schéma thérapeutique est prescrit.
La procédure ne provoque pas d'inconfort, car il est nécessaire d'obtenir du matériel d'analyse, qui est prélevé sur n'importe quel liquide corporel: salive, crachats, grattages de la surface des muqueuses. Le sang peut également être prélevé pour analyse. La fréquence de la réaction d'immunofluorescence est prescrite par le médecin traitant, qui doit obtenir des données sur la dynamique des processus se produisant dans le corps.
Étant donné que cette analyse ne nuit pas à la fois au corps et au bien-être général d'une personne, elle peut être prescrite si nécessaire.
Types d'une telle procédure
Aujourd'hui, plusieurs variétés de cette analyse sont utilisées, chacune ayant un certain nombre de caractéristiques spécifiques et vous permettant d'obtenir l'image la plus détaillée des processus se produisant dans le corps.
Les types de réactions d'immunofluorescence comprennent :
- - l'un des diagnostics les plus en développement, cette analyse permet d'obtenir des données quantitatives sans recourir à des dilutions en série. En utilisant les mesures obtenues de la densité optique du liquide, il est possible de déterminer avec précision le niveau de concentration du composant souhaité. Les larges possibilités de ce type d'analyse sont exploitées lorsque des anticorps monoclonaux sont utilisés pour sa mise en oeuvre, ce qui permet de déterminer la phase du processus infectieux, sa sévérité ;
- Diagnostic ADN- cette méthode est basée sur la liaison complémentaire de nucléotides, pour laquelle des liquides tels que la salive, le sang, le liquide céphalo-rachidien, l'urine, les crachats, les échantillons de biopsie et le sang peuvent être utilisés. Cette méthode détecte le plus efficacement la présence de papillomavirus dans le corps, cependant, de nombreux systèmes de test modernes peuvent parfois donner des résultats faux positifs et faux négatifs. La raison en est peut-être la contamination d'échantillons de fluides pour l'analyse d'ADN spécifique, dont la présence peut avoir un caractère niché ou total;
- immunochromatographie- la spécificité de cette méthode pour déterminer la présence d'un environnement pathologique et de virus dans l'organisme est l'utilisation d'anticorps marqués lors de la réaction. Cette méthode de diagnostic est utilisée pour identifier et le degré d'activité du processus d'infection par les streptocoques du groupe A, ainsi que les chlamydia des types suivants : Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia d'Oxoid. Possédant la sensibilité la plus élevée, testez les systèmes basés sur cette méthodologie de recherche. sont généralement utilisés comme test d'orientation.
Les variétés répertoriées ont des caractéristiques de conduite et des caractéristiques spécifiques des résultats, cependant, elles visent toutes à obtenir des données sur la présence de micro-organismes pathologiques et de virus dans le corps, ainsi que sur le degré de leur reproduction et de leur activité.
Indications pour la réalisation
Une réaction d'immunofluorescence peut être prescrite pour détecter tout type d'environnement pathologique dans l'organisme.
Chlamydia, trichomonas, gonocoques et, ainsi que lamblia de tous types, sont déterminés lors de ce type de diagnostic. et, et d'autres maladies nécessitent également RIF. La nomination d'un médecin pour sa mise en œuvre est obligatoire.
Contre-indications à la tenue
Étant donné que tout type de liquide corporel est nécessaire pour cette réaction, leur prise n'est généralement pas difficile et il n'y a pas de contre-indications pour effectuer une réaction d'immunofluorescence. Cependant, pendant la grossesse et chez les enfants de moins de 6 mois, les prélèvements pour la recherche sont réalisés avec les plus grandes précautions.
L'absence de contre-indication permet de réaliser ce type de diagnostic lorsqu'un médecin le prescrit à tous les patients. Sa sécurité est garantie par l'utilisation d'un instrument désinfecté et de seringues jetables.
Préparation à la procédure
Il n'y a pas de caractéristiques de prise de matériel pour cette analyse. Le sang pour lui est prélevé à jeun, de sorte qu'il ne contient pas une teneur élevée en substances susceptibles de modifier le vrai témoignage et de donner une fausse image.
Comment se déroule l'échantillonnage
Étant donné qu'aucune préparation spéciale n'est requise pour l'analyse, ne manger que 12 heures avant qu'il ne soit exclu et le manque d'utilisation médicaments, le matériau d'essai est considéré comme un processus normal de prélèvement de fluide corporel pour analyse.
Les sensations subjectives pendant la procédure peuvent varier en fonction de la sensibilité.
Déchiffrer les résultats
L'utilisation de systèmes de test modernes vous permet d'obtenir les résultats d'analyse les plus précis. Les données suivantes sont utilisées pour déchiffrer le résultat :
- degré d'intensité de fluorescence;
- teinte fluorescente;
- la nature périphérique du processus incandescent de l'objet;
- caractéristiques de la morphologie, emplacement de l'agent pathogène dans le frottis prélevé du matériel d'essai et ses dimensions.
Lors de l'étude d'objets de grande taille (par exemple, gardenerella, Trichomonas, cellules déjà atteintes par des virus), les critères listés ci-dessus permettent d'obtenir les résultats les plus fiables. Cependant, les corps élémentaires des mycoplasmes et des chlamydia ont des tailles qui se situent à la limite de la résolution d'un microscope à fluorescence, ce qui rend difficile
rend difficile l'obtention d'un résultat précis, car la lueur périphérique perd une partie de son intensité. Les critères restants ne suffisent plus pour une identification précise des microorganismes étudiés. Pour cette raison, des exigences particulières sont imposées aux spécialistes qui mènent ce type de recherche : le niveau de leurs qualifications doit être suffisant pour opérer avec les données disponibles.
Pour cette raison, seul un médecin ayant le niveau de qualification approprié peut prendre en charge le décryptage de l'analyse obtenue. Découvrez le prix de la recherche RIF ci-dessous.
coût moyen
Le prix d'un test d'immunofluorescence dépend du lieu et du niveau du test. établissement médical et ainsi que les qualifications de la personne effectuant l'analyse. Aujourd'hui, le coût varie de 1280 à 2160 roubles.
La vidéo ci-dessous vous en dira plus sur les réactions immunologiques :
Dans la syphilis primaire, un chancre solide ou ponctué des ganglions lymphatiques est examiné à la recherche d'un tréponème pâle. Dans la syphilis secondaire, le matériau est prélevé à la surface des papules érodées sur la peau, les muqueuses, les fissures, etc. Avant de prélever le matériau afin de nettoyer divers contaminants, la surface des foyers (érosion, ulcères, fissures) doit être soigneusement essuyé avec un coton-tige stérile, qui est humidifié avec une solution isotonique de chlorure de sodium ou prescrire des lotions avec la même solution. La surface nettoyée est séchée avec un coton-tige sec et une boucle ou une spatule en platine irrite légèrement les zones périphériques, tout en pressant légèrement la base de l'élément avec les doigts dans un gant en caoutchouc jusqu'à ce qu'un liquide tissulaire (sérum) apparaisse, à partir duquel le médicament est préparé pour la recherche. L'obtention de liquide tissulaire est importante pour le diagnostic de la syphilis, car les tréponèmes pâles sont situés dans la lumière des capillaires lymphatiques, dans les interstices tissulaires autour des vaisseaux lymphatiques et sanguins.
Ponction des ganglions lymphatiques régionaux
La peau sur les ganglions lymphatiques est traitée avec une solution d'iode à 96% d'alcool et à 3-5% d'alcool. Ensuite, 1 et 2 doigts de la main gauche fixent le ganglion lymphatique. Main droite prendre une seringue stérile avec quelques gouttes de solution de chlorure de sodium isotonique, qui est injectée parallèlement à l'axe longitudinal du ganglion lymphatique. L'aiguille est poussée dans différentes directions vers la paroi opposée de la capsule ganglionnaire et le contenu de la seringue est lentement injecté. Avec les doigts de la main gauche, le ganglion lymphatique est légèrement massé. Avec le retrait lent de l'aiguille, le piston de la seringue est simultanément avancé, aspirant le contenu du ganglion lymphatique. Le matériau est appliqué sur une lame de verre (avec une petite quantité de matériau, une goutte de solution isotonique de chlorure de sodium est ajoutée), recouverte d'une lamelle couvre-objet. L'étude du médicament natif est réalisée dans le champ de vision sombre à l'aide d'un microscope optique à lumière avec un condenseur à fond noir (objectif 40, 7x, 10x ou 15x). Des tréponèmes pâles peuvent également être trouvés dans des préparations colorées. Lorsqu'ils sont colorés selon Romanovsky-Giemsa, les tréponèmes pâles sont colorés en rose, selon Fontan et Morozov en marron (noir), selon la méthode Burri, les tréponèmes non colorés sont détectés sur un fond sombre.Diagnostic sérologique
L'importance dans le diagnostic de la syphilis, l'évaluation de l'efficacité du traitement, l'établissement d'un critère de guérison, l'identification des formes latentes résistantes est donnée aux réactions sérologiques standard (classiques) et spécifiques. Les tests sérologiques standard ou classiques (SSR) comprennent :- réaction de Wasserman (RV),
- réactions sédimentaires de Kahn et Sachs-Vitebsky (cytocholique),
- réaction sur verre (méthode expresse),
- réaction d'immobilisation du tréponème pallidum (RIBT),
- réaction d'immunofluorescence (RIF).
Réaction de Wasserman (RV)
- développé par A. Wasserman avec A. Neisser et C. Bruck en 1906. La réaction de Wasserman est basée sur le phénomène de fixation du complément (réaction de Borde-Gangu) et permet le dosage d'anticorps anti-lipides (réagines). Selon les concepts modernes, la réaction de Wasserman détermine les anticorps dirigés contre les lipides du macro-organisme, et non le tréponème pâle, et la réaction révèle un processus auto-immun provoqué par la dénaturation des tissus du macro-organisme par des tréponèmes pâles avec formation d'un complexe lipoprotéique (conjugué), dans lequel les lipides (haptènes) sont le déterminant.Habituellement, RV est placé avec deux ou trois antigènes. Les plus couramment utilisés sont l'antigène très sensible de la cardiolipine (extrait de cœur de bovin enrichi en cholestérol et en lécithine) et l'antigène tréponémique (suspension soniquée de treponema pallidum de culture anatogène). Avec les réagines du sérum sanguin du patient, ces antigènes forment un complexe immun capable d'adsorber et de lier le complément. Pour la détermination visuelle du complexe formé (réagines + antigène + complément), un système hémolytique est utilisé comme indicateur (un mélange d'érythrocytes de bélier avec du sérum hémolytique). Si le complément est lié dans la 1ère phase de la réaction (réagines + antigène + complément), l'hémolyse ne se produit pas - les érythrocytes se précipitent en un précipité facilement perceptible (PB positif). Si le complément n'est pas lié en phase 1 en raison de l'absence de réagines dans le sérum à tester, il sera utilisé par le système hémolytique et une hémolyse se produira (PB négatif). Le degré de sévérité de l'hémolyse dans le cadre du RV est estimé par les plus : l'absence totale d'hémolyse ++++ ou 4+ (RV fortement positif) ; hémolyse à peine commencée +++ ou 3+ (PB positif) ; hémolyse significative ++ ou 2+ (PB faiblement positif) ; image incompréhensible d'hémolyse ± (RV douteuse) ; hémolyse complète - (la réaction de Wassermann est négative).
En plus de l'évaluation qualitative de RV, il existe une formulation quantitative avec différentes dilutions de sérum (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Le titre des réagines est déterminé par la dilution maximale, qui donne toujours un résultat nettement positif (4+). La formulation quantitative du RV est importante dans le diagnostic de certains formes cliniques infection syphilitique, ainsi que dans le suivi de l'efficacité du traitement. Actuellement, la réaction de Wasserman est étagée avec deux antigènes (cardiolipine et souche tréponémique à sonorité Reiter). En règle générale, le RV devient positif 5 à 6 semaines après l'infection chez 25 à 60 % des patients, à 7 à 8 semaines - chez 75 à 96 %, à 9 à 19 semaines - chez 100 %, bien que ces dernières années parfois plus tôt ou plus tard. Dans le même temps, le titre de réagines augmente progressivement et atteint une valeur maximale (1: 160-1: 320 et plus) en cas d'apparition d'éruptions cutanées généralisées (syphilis fraîche secondaire). Lorsque RV est positif, un diagnostic de syphilis séropositive primaire est posé.
Avec frais secondaire et la syphilis récurrente secondaire, RV est positif chez 100 % des patients, mais chez les patients dénutris avec un système immunitaire affaibli peut être observé résultat négatif. Par la suite, le titre des réagines diminue progressivement et dans la syphilis récurrente secondaire ne dépasse généralement pas 1:80-1:120.
Avec la syphilis tertiaire Le RV est positif chez 65 à 70 % des patients et un faible titre de réagines est généralement observé (1:20-1:40). Dans les formes tardives de syphilis (syphilis des organes internes, du système nerveux), un RV positif est observé dans 50 à 80 % des cas. Le titre de réactif varie de 1:5 à 1:320.
Avec syphilis latente RV positif est observé chez 100 % des patients. Le titre de réactif est de 1:80 à 1:640, et avec la syphilis latente tardive de 1:10 à 1:20. déclin rapide le titre des réagines (jusqu'à la négativité complète) pendant le traitement indique l'efficacité du traitement.
Inconvénients de la réaction de Wassermann- manque de sensibilité stade initial la syphilis primaire est négative). Il est également négatif chez 1/3 des patients, s'ils ont été traités par des antibiotiques dans le passé, chez les patients atteints de syphilis active tertiaire avec lésions de la peau et des muqueuses, de l'appareil ostéoarticulaire, des organes internes, du système nerveux central, avec syphilis congénitale tardive .
Manque de spécificité- La réaction de Wasserman peut être positive chez les personnes qui n'ont jamais été malades auparavant et qui ne souffrent pas de syphilis. En particulier, des résultats de VR faussement positifs (non spécifiques) sont observés chez des patients qui souffrent de lupus érythémateux disséminé, de lèpre, de paludisme, de néoplasmes malins, de lésions hépatiques, d'infarctus du myocarde étendus et d'autres maladies, et parfois complètement personnes en bonne santé.
Une réaction de Wasserman faussement positive à court terme est détectée chez certaines femmes avant ou après l'accouchement, chez les personnes toxicomanes, après anesthésie, consommation d'alcool. En règle générale, le RV faux positif est faiblement exprimé, souvent avec un faible titre de réagines (1: 5-1: 20), positif (3+) ou faiblement positif (2+). Dans les examens sérologiques de masse, la fréquence faux résultats positifs est de 0,1 à 0,15 %. Pour pallier le manque de sensibilité, ils utilisent la mise au froid (réaction de Collard) et en même temps on la fixe avec d'autres réactions sérologiques.
Réactions sédimentaires de Kahn et Sachs-Vitebsky
La réaction de Wasserman est utilisée en combinaison avec deux réactions sédimentaires (Kahn et Zaks-Vitebsky), au cours de la production desquels des antigènes plus concentrés sont préparés. Méthode express (microréaction sur verre) - fait référence aux réactions lipidiques et est basée sur une réaction de précipitation. Il est placé avec un antigène cardiolipine spécifique, dont 1 goutte est mélangée à 2-3 gouttes du sérum sanguin étudié dans les puits d'une plaque de verre spéciale.Avantage- la rapidité d'obtention d'une réponse (en 30-40 minutes). Les résultats sont évalués par la quantité de précipité et la taille des flocons. La gravité est définie comme CSR - 4+, 3+, 2+ et négatif. Il convient de noter que des résultats faussement positifs sont observés plus souvent qu'avec RV. En règle générale, la méthode express est utilisée pour les examens de masse de la syphilis, lors des examens dans les laboratoires de diagnostic clinique, les services somatiques et les hôpitaux. Sur la base des résultats de la méthode expresse, le diagnostic de la syphilis est interdit, son utilisation chez les femmes enceintes, les donneurs, ainsi que pour le contrôle après traitement est exclue.
Réaction d'immobilisation de Treponema pallidum (RIBT)
Réaction d'immobilisation de Treponema pallidum (RIBT)- proposé en 1949 par R.W.Nelson et M.Mayer. C'est le test de diagnostic le plus spécifique de la syphilis. Cependant, la complexité et le coût élevé du réglage limitent son application. Dans le sérum sanguin des patients, des anticorps vidéo-spécifiques (immobilisines) sont déterminés, ce qui conduit à l'immobilité des tréponèmes pâles en présence de complément. L'antigène est le tréponème pallidum pathogène vivant isolé de lapins infectés par la syphilis. À l'aide d'un microscope, le nombre de tréponèmes pâles immobilisés (immobilisés) est compté et les résultats du RIBT sont évalués : l'immobilisation des tréponèmes pâles de 51 à 100 % est positive ; de 31 à 50% - faiblement positif ; de 21 à 30% - douteux; de 0 à 20% - négatif.Le RIBT est important dans le diagnostic différentiel distinguer les réactions sérologiques faussement positives des réactions dues à la syphilis. Devient positif plus tard que RV, RIF et donc il n'est pas utilisé pour diagnostiquer les formes infectieuses de la syphilis, bien que dans la période secondaire de la syphilis, il soit positif chez 85 à 100% des patients.
Dans la période tertiaire de la syphilis avec atteinte des organes internes, du système musculo-squelettique et du système nerveux, le RIBT est positif dans 98 à 100 % des cas ( RV est souvent négatif).
Il faut se rappeler que le RIBT peut s'avérer être un faux positif si des médicaments tréponémocides (pénicilline, tétracycline, macrolithes, etc.) sont présents dans le sérum à tester, ce qui provoque une immobilisation non spécifique du tréponème pâle. À cette fin, le sang pour RIBT est examiné au plus tôt 2 semaines après la fin des antibiotiques et d'autres médicaments.
Le RIBT, comme le RIF, est lentement négatif pendant le traitement, il n'est donc pas utilisé comme contrôle pendant le traitement.
Réaction d'immunofluorescence (RIF)
Réaction d'immunofluorescence (RIF)- développé en 1954 par A.Coons et utilisé pour la première fois pour diagnostiquer une infection syphilitique par Deacon, Falcone, Harris en 1957. RIF est basé sur une méthode indirecte pour la détermination des anticorps fluorescents. Les antigènes pour la stadification sont des tréponèmes pâles pathogènes tissulaires fixés sur des lames de verre, sur lesquelles le sérum à tester est appliqué. Si le sérum à tester contient des anticorps anti-tréponémiques apparentés aux IgM et IgG, ils se lient fortement à l'antigène - tréponème, qui est détecté au microscope à fluorescence à l'aide d'un sérum fluorescent anti-espèce ("anti-humain").Résultats RIF sont pris en compte par l'intensité de la lueur des tréponèmes pâles dans la préparation (lueur jaune-vert). En l'absence d'anticorps anti-tréponémiques dans le sérum, les tréponèmes pâles ne sont pas détectés. En présence d'anticorps, la lueur du tréponème pâle est détectée, dont le degré est exprimé en plus: 0 et 1+ - une réaction négative; de 2+ à 4+ - positif.
RIF fait référence à des réactions tréponémiques de groupe et est placé dans une dilution du sérum à tester de 10 et 200 fois (RIF-10 et RIF-200). RIF-10 est considéré comme plus sensible, mais les résultats positifs non spécifiques tombent souvent qu'avec RIF-200 (il a une spécificité plus élevée). D'habitude, RIF devient positif plus tôt que RW- positif dans la syphilis séronégative primaire chez 80% des patients, chez 100% dans la période secondaire de la syphilis, toujours positif dans la syphilis latente et dans 95-100% des cas dans les formes tardives et la syphilis congénitale.
Spécificité RIF augmente après le prétraitement du sérum à tester avec un antigène tréponémique sorbant-ultrasonique qui se lie aux anticorps de groupe (RIF - abs).
Indications pour la stadification RIBT et RIF- diagnostic de syphilis latente pour confirmer la spécificité du complexe de réactions lipidiques en cas d'infection syphilitique sur la base d'un RV positif. Un RIBT et un RIF positifs sont la preuve d'une syphilis latente. Avec RV faussement positif dans diverses maladies (lupus érythémateux disséminé, néoplasmes malins, etc.) et si les résultats répétés du RIBT et du RIF sont négatifs, cela indique la nature non spécifique du RV. Suspicion de lésions syphilitiques tardives des organes internes, du système musculo-squelettique, du système nerveux en présence de RV négatif chez les patients. Suspicion de syphilis séronégative primaire, lorsque chez les patients présentant des examens répétés d'érosion (ulcère) de la surface, avec ponction des ganglions lymphatiques régionaux élargis, le tréponème pâle n'est pas détecté - dans ce cas, seul le RIF est défini - 10.
Lors de l'examen d'individus avec un RV négatif qui ont eu des contacts sexuels et familiaux à long terme avec des patients atteints de syphilis, compte tenu de la possibilité probable de les traiter dans un passé récent avec des médicaments antisyphilitiques qui ont causé RV négatif. Dosage immuno-enzymatique (ELISA, ELISA - dosage immuno-enzymatique) - la méthode a été développée par E.Engvall et al., S.Avrames (1971). L'essentiel consiste en la combinaison d'un antigène syphilitique adsorbé à la surface d'un support en phase solide avec un anticorps du sérum sanguin étudié et la détection d'un complexe antigène-anticorps spécifique à l'aide d'un sérum sanguin immun anti-espèce marqué par une enzyme. Cela vous permet d'évaluer visuellement les résultats d'ELISA par le degré de changement de la couleur du substrat sous l'action de l'enzyme qui fait partie du conjugué. Des résultats ELISA non fiables peuvent survenir en raison d'une dilution insuffisante des ingrédients, d'une violation des régimes de température et de temps, d'une incohérence du pH des solutions, d'une contamination de la verrerie de laboratoire et d'une mauvaise technique de lavage du support.
Réaction d'hémagglutination passive (RPHA)
Proposé comme test de diagnostic de la syphilis T. Rathlev (1965.1967), T. Tomizawa (1966). La macromodification de la réaction est appelée TRHA, la micromodification est MHA-TR, la version automatisée est AMNA-TR, la réaction avec des macrocapsules de polyurée au lieu d'érythrocytes est MSA-TR. La sensibilité et la spécificité de RPHA sont similaires à RIBT, RIF, mais RPHA est moins sensible dans les formes précoces de syphilis par rapport à RIF-abs et plus sensible dans les formes tardives, avec syphilis congénitale. RPGA est mis en versions qualitatives et quantitatives.Technique de prélèvement sanguin pour les réactions sérologiques
Pour les recherches sur RV, RIF, RIBT, le sang est prélevé de la veine cubitale à jeun ou au plus tôt 4 heures après un repas avec une seringue stérile ou une aiguille (par gravité). Sur le site de prélèvement, la peau est prétraitée avec de l'alcool à 70 %. La seringue et l'aiguille doivent être rincées avec une solution isotonique de chlorure de sodium. 5 à 7 ml du sang à tester sont versés dans un tube à essai propre, sec et froid. Un papier vierge avec le nom de famille du patient, ses initiales, le numéro de l'historique médical ou de la carte de consultation externe, la date du prélèvement sanguin est collé sur le tube à essai. Après le prélèvement de sang, le tube à essai est placé dans un réfrigérateur avec un régime de température de +4°+8°C jusqu'au lendemain. Le lendemain, le sérum est drainé pour la recherche. Si le sang n'est pas utilisé le lendemain, le sérum doit être drainé du caillot et conservé au réfrigérateur pendant 1 semaine au maximum. Pour la recherche sur RIBT, le tube à essai doit être spécialement préparé et stérile. En cas de violation des règles de prélèvement de sang pour la recherche, le non-respect des conditions peut entraîner une distorsion des résultats.Il est déconseillé de prélever du sang pour la recherche après avoir mangé, alcool, divers médicaments, après l'introduction de divers vaccins, pendant cycle menstruel parmi les femmes.
Pour la recherche sur la méthode express, le sang a été prélevé du bout du doigt, comme c'est le cas lorsqu'il est prélevé pour la RSE, mais le sang est prélevé par 1 capillaire de plus. La méthode express peut également être réalisée avec du sérum sanguin obtenu par ponction veineuse. S'il est nécessaire d'effectuer des tests sanguins dans des laboratoires éloignés, du sérum sec peut être envoyé à la place du sang (méthode de la goutte sèche). Pour ce faire, le lendemain du prélèvement sanguin, le sérum est séparé du caillot et aspiré dans une seringue stérile à raison de 1 ml. Ensuite, le sérum est versé sous la forme de 2 cercles séparés sur une bande de papier à lettres épais (papier ciré ou cellophane) de taille 6x8 cm.Le nom, les initiales du sujet et la date du prélèvement sanguin sont inscrits sur le bord libre de le papier. Le papier sérum est protégé de la lumière directe du soleil et laissé à température ambiante jusqu'au lendemain. Le sérum se dessèche sous forme de petits cercles d'un film vitreux jaunâtre brillant. Après cela, des bandes de papier avec du sérum séché sont enroulées comme de la poudre pharmaceutique et envoyées au laboratoire, indiquant le diagnostic et dans quel but il est étudié.
Résistance sérologique
Chez une partie (2% ou plus) des patients atteints de syphilis, malgré le traitement antisyphilitique à part entière, il y a un ralentissement (absence) de réactions sérologiques négatives après la fin du traitement jusqu'à 12 mois ou plus. Il existe une résistance dite sérologique, qui est devenue fréquemment observée ces dernières années. Il existe des formes de résistance sérologique :- Vrai(absolu, inconditionnel) - il est nécessaire d'effectuer un traitement antisyphilitique supplémentaire, associé à une thérapie non spécifique pour augmenter les forces immunitaires de l'organisme.
- Relatif- après un traitement complet, les tréponèmes pâles forment des kystes ou des formes L, qui se trouvent dans le corps dans un état de faible virulence et, par conséquent, un traitement supplémentaire ne modifie pas les indicateurs de réactions sérologiques, en particulier RIF et RIBT.
Pseudo-résistance- après le traitement, malgré des réactions sérologiques positives, il n'y a pas de tréponème pâle dans le corps. Il n'y a pas d'antigène dans le corps, mais la production d'anticorps se poursuit, qui se fixe lors de la mise en place de réactions sérologiques.
Une résistance sérologique peut se développer en raison de :
- traitement inadéquat sans tenir compte de la durée et du stade de la maladie;
- dose insuffisante et notamment due à la non prise en compte du poids corporel des patients ;
- violations de l'intervalle entre l'introduction de drogues;
- préservation du tréponème pâle dans le corps malgré le traitement spécifique à part entière, en raison de leur résistance à la pénicilline et à d'autres médicaments de chimiothérapie en présence de lésions cachées et enkystées dans les organes internes, le système nerveux, les ganglions lymphatiques, qui sont inaccessibles à médicaments antibactériens(souvent des tréponèmes pâles se trouvent dans les tissus de la cicatrice plusieurs années après la fin du traitement, dans les ganglions lymphatiques, il est parfois possible de détecter des tréponèmes pâles 3 à 5 ans après le traitement antisyphilitique);
- réduction des forces de protection à diverses maladies et intoxications (endocrinopathie, alcoolisme, toxicomanie, etc.) ;
- épuisement général (alimentation pauvre en vitamines, protéines, graisses).
- maladies concomitantes non spécifiques des organes internes, troubles du système cardiovasculaire, rhumatismes, dysfonctionnements des systèmes endocrinien et nerveux, dermatoses chroniques sévères, néoplasmes malins;
- lésions du système nerveux (blessures graves, commotion cérébrale, traumatisme mental);
- grossesse intoxications chroniques alcool, drogues à base de nicotine; maladies infectieuses(paludisme, tuberculose, hépatite virale, dysenterie, typhus, typhoïde et fièvre récurrente).
Méthodes directes
Microscopie à fond noir
Les tréponèmes pâles ne peuvent pas se développer sur des milieux nutritifs et ne sont pas visualisés au microscope optique. Étant donné que la détection d'un agent pathogène à l'aide de la microscopie conventionnelle est impossible, un microscope spécial à champ sombre est utilisé, où l'agent pathogène est visible sous forme de spirale sur un fond sombre.
Pour la microscopie, un biomatériau est prélevé sur un foyer suspect de maladie. La microscopie à fond noir est manière possibleévaluation des lésions cutanées telles que le chancre de la syphilis primaire ou le condylome de la syphilis secondaire. Si la lésion maculo-papuleuse est sèche, examinez l'aspiration des ganglions lymphatiques.
Un résultat négatif n'exclut pas un processus pathologique ; statistiquement, l'agent pathogène ne peut être détecté que dans 80 % des cas.
Diagnostic PCR
Une réaction visant une augmentation multiple de l'ADN du tréponème pâle nous permet de conclure à l'existence d'une infection par la syphilis ou à son absence.
Le biomatériau à analyser peut être n'importe quoi: du sang, le contenu de la syphilis, liquide cérébro-spinal etc. Le test est adapté à la période d'incubation.
La PCR est complètement spécifique.
Tests sérologiques indirects de la syphilis : tests tréponémiques et non tréponémiques
Les tests sérologiques (CSR ou un complexe de réactions sérologiques) sont considérés comme le moyen le plus courant de diagnostiquer tous les stades de la syphilis. On distingue les réactions suivantes :
- agglutination;
- précipitation;
- immunofluorescence;
- immunoessai enzymatique, etc.
De plus, les tests sérologiques de la syphilis sont divisés en tréponémiques et non tréponémiques.
Non tréponémique
Si la syphilis acquise est suspectée, des tests de dépistage sont effectués, pour lesquels ils utilisent tests non tréponémiques , qui déterminent les anticorps dirigés contre les antigènes lipoïdes des tissus de l'hôte ou de l'agent pathogène dans diverses modifications. En Fédération de Russie, une réaction de microprécipitation (RMP) est régulièrement effectuée, ce qui permet de détecter des anticorps dirigés contre les cellules endommagées par des agents pathogènes dans le sang. La fiabilité du dépistage est élevée, mais la spécificité est faible, de sorte que les tests conviennent au dépistage primaire à des fins préventives.
La sensibilité des tests rapides est estimée à 78-86 % pour la syphilis primaire, 100 % pour la syphilis secondaire et 95-98 % pour la syphilis tertiaire.
Spécificité - de 85 à 99 %, parfois moins, qui se produit dans les conditions suivantes :
- gestation;
- menstruation;
- oncologie;
- maladies du tissu conjonctif;
- maladies virales;
- maladie du foie;
- vaccination;
- MI "fraîche" ;
- typhus, etc...
De plus, l'excès de graisse dans l'alimentation, la consommation de boissons alcoolisées et certains médicaments peuvent entraîner des faux positifs.
Les résultats des tests de dépistage deviennent positifs 1 à 2 semaines après la formation du chancre. Les tests non tréponémiques sont négatifs quelque temps après le traitement. Avec le statut VIH, les anticorps non tréponémiques peuvent être détectés longtemps, parfois tout au long de la vie (ce qui est confirmé par les résultats d'un essai randomisé approprié).
Autres types de tests non tréponémiques : VDRL, test à la plasmoréagine (RPR), test au rouge de toluidine, test de fixation du complément à l'antigène cardiolipine (RSKk).
Réaction de Wasserman (RW)
La fixation du complément est la réponse du système immunitaire à l'infection, le résultat varie de négatif (mettez "-") à fortement positif "++++" ou 4 plus.
Au stade initial de la syphilis primaire, RW est négatif.
Tréponémique
En raison de la possibilité de résultats faussement positifs, pour confirmer tout résultat de test non tréponémique positif ou douteux, utilisez tests tréponémiques :
- réaction d'immunofluorescence (RIF);
- hémagglutination (RPGA),
- dosage immunoenzymatique (ELISA) pour les immunoglobulines de classe G (IgG) et les immunoglobulines M (IgM);
- immunotransfert;
- RIBT / RIT (réaction d'immobilisation du tréponème pallidum).
Les tests tréponémiques ne sont pas utilisés pour évaluer l'efficacité du traitement.
Le RIF pour la détermination des anticorps tréponémiques de la classe IgG est utilisé après un résultat positif des tests rapides (sensibilité 84% pour la syphilis primaire et 100% pour les autres stades, spécificité 96%). Non applicable pour le diagnostic chez les nouveau-nés.
Certains laboratoires utilisent des études de dépistage « inversées ».
Le CDC (Centers for Disease Control and Prevention, USA) recommande des études traditionnelles, avec vérification par des tests quantitatifs non tréponémiques, avec un résultat positif, un traitement est effectué.
Réaction d'immunofluorescence (RIF)
Du sérum contenant des anticorps marqués au fluorochrome spécifiques de l'antigène du tréponème pâle est appliqué sur le matériel collecté, l'agent pathogène attire les complexes immuns, ce qui le fait briller dans un microscope à fluorescence.
Réaction d'hémoagglutination passive ou RPHA
Avant l'apparition de l'hémagglutination (collage) des érythrocytes, au moins 4 semaines doivent s'écouler à partir du moment de l'introduction du tréponème pâle.
Les érythrocytes préparés avec des fractions protéiques fixes de l'agent pathogène interagissent avec le plasma, s'il existe des anticorps contre la syphilis, une réaction se produit.
Convient pour confirmer n'importe quel stade de la maladie.
Dosage d'immunosorbant lié
Il est basé sur une réaction antigène-anticorps. Des anticorps de différentes classes sont détectés, qui peuvent être quantifiés.
Les résultats obtenus permettent de juger de la durée du processus pathologique, du succès du traitement, du statut immunologique et de l'activité des agents pathogènes.
L'immunoblot est un type d'ELISA, utilisé pour des diagnostics approfondis avec tous les résultats douteux.
Sensibilité et spécificité proches de 100%, la méthode ultra-sensible d'aujourd'hui pour l'identification des protéines.
RIBT
La méthode est basée sur la réaction antigène-anticorps. Treponema pallidum, cultivé dans des testicules de lapin, sert d'antigène. Lorsqu'ils interagissent avec les anticorps d'une personne infectée, les agents pathogènes perdent leur mobilité. La réponse est évaluée par microscopie à fond noir.
Remarque
Le RIBT est actuellement utilisé moins souvent en raison de l'intensité de la main-d'œuvre, mais l'analyse peut être utile pour résoudre des problèmes controversés ( réactions faussement positives pour la syphilis).
Diagnostic différentiel
La plus grande difficulté est le diagnostic de la syphilis tertiaire, qui est causée par des symptômes des systèmes cardiovasculaire et nerveux, ainsi que par des manifestations cutanées.
Les patients doivent être examinés pour, et.
Lister les maladies qui sont traitées diagnostic différentiel avec la syphilis :
- manifestations dermatologiques;
- verrues génitales ();
- donovanose;
- lymphogranulome vénérien;
- virus;
- pian.
Quel est le diagnostic de la syphilis
Au départ, une conversation a lieu avec le patient, au cours de laquelle les détails sont clarifiés : quand il y a eu un contact sexuel suspect et quelles sont les plaintes.
Après avoir recueilli une anamnèse, ils procèdent à un examen physique, une attention particulière est accordée aux organes génitaux et à l'anus, aux muqueuses et ganglions lymphatiques. Un diagnostic préliminaire peut déjà être établi. La vérification finale a lieu à l'aide d'essais en laboratoire.
Parlant simplement du complexe, certains tests révèlent l'agent causal de la syphilis, tandis que d'autres reflètent la réaction du corps à l'introduction du tréponème pâle.
Pour établir le diagnostic final de RPHA, il faut ajouter 1 analyse tréponémique et 1 non tréponémique.
Diagnostic de la syphilis chez les femmes enceintes
Le dépistage obligatoire de la syphilis est effectué plusieurs fois pendant la grossesse.
Une référence pour analyse DSC est délivrée lors de la première visite d'une femme à une consultation, et l'examen est effectué trois fois pendant la grossesse. Les patients appartenant à un groupe à haut risque avec une histoire lourde : asociaux, dépendants, etc. nécessitent une attention particulière.
Si les résultats de l'analyse sont positifs, un diagnostic plus approfondi est effectué et, selon les indications, un traitement est prescrit, qui dépend du stade et des manifestations cliniques.
Diagnostic de la syphilis congénitale
La plupart des enfants atteints sont nés de mères non traitées ou ont reçu une thérapie trop tard.
Les tests tréponémiques utilisant du sérum néonatal ne sont pas recommandés en raison du transfert passif d'anticorps IgG. Tous les bébés nés de mères atteintes de syphilis doivent être dépistés par un test sérologique quantitatif non tréponémique (RPR ou VDRL) effectué à partir du sérum du nouveau-né.
Comment interpréter les résultats des études sérologiques
La réaction de microprécipitation, RIF et RPHA sont négatives - la norme, positives - confirmation de la syphilis.
La réaction de microprécipitation est négative, les autres sont positives - des antécédents de syphilis après un traitement spécifique ou un stade tardif.
RIF négatif avec RPHA positif et réaction de microprécipitation - le résultat est douteux, évaluation complète répétée.
Un résultat négatif de RIF et de microprécipitation, mais un RPHA positif est une condition après une antibiothérapie réussie ou un résultat faussement positif.
RIF positif avec RPHA négatif et réaction de microprécipitation - stade précoce, le traitement effectué ou le manque de fiabilité du résultat.
Une réaction de microprécipitation positive, non confirmée par RPHA ou RIF, est l'absence de syphilis.
Examen instrumental pour la syphilis
Le diagnostic instrumental est effectué en fonction de l'implication des organes. Par exemple, une maladie granulomateuse du foie peut être observée dans l'abdomen.
Les patients atteints de syphilis tertiaire peuvent présenter une dilatation de l'aorte. Une calcification linéaire le long de l'aorte est révélatrice d'une aortite syphilitique.