Táto metóda využíva fenomén luminiscencie.
Podstata fenoménu luminiscencie spočíva v tom, že keď sú rôzne druhy energie (svetelné, elektrické atď.) Absorbované molekulami niektorých látok, ich atómy prechádzajú do excitovaného stavu a potom, keď sa vrátia do pôvodného stavu, uvoľňujú absorbovanú energiu vo forme svetelného žiarenia.
V RIF sa luminiscencia prejavuje vo forme fluorescencie - to je žiara, ktorá vzniká v okamihu ožiarenia vzrušujúcim svetlom a zastaví sa ihneď po jeho ukončení.
Mnoho látok a živých mikroorganizmov má svoju vlastnú fluorescenciu (tzv. Primárnu), ale jej intenzita je veľmi nízka. Látky s intenzívnou primárnou fluorescenciou a používané na dodanie fluorescenčných vlastností nefluorescenčným látkam sa nazývajú fluorochrómy. Táto indukovaná fluorescencia sa nazýva sekundárna fluorescencia.
Na excitáciu fluorescencie v luminiscenčnej mikroskopii sa najčastejšie používa ultrafialová alebo modrofialová časť spektra (vlnová dĺžka 300 - 460 nm). Na tieto účely majú laboratóriá fluorescenčné mikroskopy rôznych modelov - ML-1-ML-4, „Lumam“.
Vo virologickej praxi sa používajú dve hlavné metódy luminiscenčnej mikroskopie: fluorochromácia a fluorescenčné protilátky (alebo RIF).
Fluorochromácia - Toto je liečba liekov fluorochrómom s cieľom zvýšiť pevnosť a kontrast ich žiary. Najväčší záujem je o fluorochróm akridínovej oranžovej, ktorý indukuje polychromatickú fluorescenciu nukleových kyselín. Keď sa teda prípravky spracujú s týmto fluórchrómom, deoxyribonukleová kyselina fluoreskuje jasne zelenou farbou a kyselina ribonukleová - rubínovo červená.
Metóda RIF spočíva v tom, že protilátky naviazané na fluorochróm si zachovávajú schopnosť vytvárať špecifickú väzbu s homológnym antigénom. Výsledný komplex antigén + protilátka je v dôsledku prítomnosti fluórchrómu v ňom detekovaný pod luminiscenčným mikroskopom podľa jeho charakteristickej žiary.
Na získanie protilátok sa používajú vysoko aktívne hyperimunné séra, z ktorých sa protilátky izolujú a značia fluórchrómom. Najbežnejšie používaným fluorochrómom je FITC-fluoresceínizotiokyanát (zelená žiara) a PCX-rodamínsulfochlorid (červená žiara). Protilátky značené fluórchrómom sa nazývajú konjugáty.
Spôsob prípravy a farbenia prípravkov je nasledovný:
- pripravte škvrny, odtlačky orgánov alebo krycie sklíčka - infikovanú bunkovú kultúru na sklenených podložných sklíčkach; možno tiež použiť histoskopické rezy;
- prípravky sa vysušia na vzduchu a zafixujú sa v chladenom acetóne pri teplote miestnosti alebo pri mínus 15 ° C (od 15 minút do 4-16 hodín);
- farbené priamou alebo nepriamou metódou; viesť záznamy pod luminiscenčným mikroskopom podľa intenzity žiary, hodnotenej krížikmi.
Zároveň sa pripravujú a farbia prípravky zo zdravého zvieraťa - kontrolné.
Existujú dve hlavné metódy použitia fluorescenčných protilátok: priama a nepriama.
Priama metóda (jednokroková)... Na fixovaný prípravok sa nanesie konjugát (fluorescenčné sérum na domnelý vírus), ktorý sa inkubuje 30 minút pri 37 ° C vo vlhkej komore. Potom sa prípravok premyje z nenaviazaného konjugátu fyziologickým roztokom (pH 7,2 - 7,5), vysuší sa na vzduchu, nanesie sa nefluorescenčný olej a skúma sa pod mikroskopom.
Priama metóda umožňuje detekciu a identifikáciu antigénu. Aby ste to dosiahli, musíte mať pre každý vírus fluorescenčné sérum.
Nepriama metóda (dvojstupňová)... Neznačené sérum obsahujúce protilátky proti domnelému vírusu sa aplikuje na fixný prípravok, inkubuje sa 30 minút pri 37 ° C, nenaviazané protilátky sa odmyjú. Na prípravok sa aplikuje fluorescenčné anti-druhovo sérum zodpovedajúce typu zvieraťa - výrobcu homológnych antivírusových protilátok, ktoré sa uchováva 30 minút pri 37 ° C. Potom sa prípravok premyje z nenaviazaných značených protilátok, vysuší sa na vzduchu, nanesie sa nefluorescenčný olej a skúma sa pod fluorescenčným mikroskopom.
Antivírusové séra sa získavajú imunizáciou zvierat globulínmi tých druhov, ktoré slúžia ako producenti antivírusových protilátok. Pokiaľ sa teda na králikoch získali antivírusové protilátky, použije sa fluorescenčné anti-králičie sérum.
Nepriama metóda umožňuje nielen detekciu a identifikáciu antigénu, ale aj odhalenie a stanovenie titra protilátky. Okrem toho táto metóda dokáže detekovať antigény rôznych vírusov pomocou jedného značeného séra, pretože je založená na použití anti-druhových sér. Častejšie sa používajú anti-králičie, anti-hovädzie, anti-konské sérum a anti-morčacie globulínové sérum.
Bolo vyvinutých niekoľko modifikácií nepriamej metódy. Najpozoruhodnejšia je metóda komplementu. Metóda spočíva v tom, že na fixovaný prípravok sa aplikuje inaktivované nefluorescenčné špecifické sérum a doplnok morčiat, inkubované 30 minút pri 37 ° C, premyté a aplikuje sa fluorescenčné antikomplementárne sérum na detekciu komplexu antigén + protilátka + komplement, inkubované 30 minút pri 37 ° C , premyje, suší na vzduchu a skúma pod fluorescenčným mikroskopom.
Výhody RIF: vysoká špecifickosť a citlivosť; jednoduchosť techniky inscenovania; minimum potrebných komponentov. Toto je expresná diagnostická metóda, pretože odpoveď môžete dostať do niekoľkých hodín. Medzi nevýhody patrí subjektivita pri hodnotení intenzity žiarenia a, bohužiaľ, niekedy sú fluorescenčné séra nekvalitné. V súčasnosti je RIF široko používaný pri diagnostike vírusových ochorení u zvierat.
Ak nájdete chybu, vyberte text a stlačte Ctrl + Enter.
Imunofluorescenčná metóda (RIF, imunofluorescenčná reakcia, Koonsova reakcia) je metóda na detekciu špecifického Ar pomocou Ab konjugovaného s fluorochrómom. Má vysokú citlivosť a špecifickosť.
Používa sa na expresnú diagnostiku infekčných chorôb (identifikácia patogénu v testovanom materiáli), ako aj na stanovenie Ab a povrchových receptorov a markerov leukocytov (imunofenotypizácia) a ďalších buniek.
V diagnostickej praxi sa často používa detekcia bakteriálnych a vírusových antigénov v infekčných materiáloch, živočíšnych tkanivách a bunkových kultúrach pomocou fluorescenčných protilátok (sér). Príprava fluorescenčných sér je založená na schopnosti niektorých fluórchrómov (napríklad fluoresceín izotiokyanátu) chemicky sa viazať na srvátkové proteíny bez ovplyvnenia ich imunologickej špecificity.
Existujú tri typy metódy: priama, nepriama, s doplnkom. Priama metóda RIF je založená na skutočnosti, že tkanivové antigény alebo mikróby ošetrené imunitnými sérami s protilátkami značenými fluórchrómami sú schopné žiariť v UV lúčoch fluorescenčného mikroskopu. Baktérie v nátere ošetrenom takýmto luminiscenčným sérom žiaria pozdĺž periférie buniek vo forme zeleného okraja.
Metóda nepriameho RIF spočíva v detekcii komplexu antigén-protilátka s použitím antiglobulínového (proti protilátkam) séra označeného fluorochrómom. Za týmto účelom sa na nátery zo suspenzie mikróbov pôsobia protilátky z antimikrobiálneho králičieho diagnostického séra. Potom sa protilátky, ktoré nenaviazali antigény mikróbov, zmyjú a protilátky zostávajúce na mikróboch sa detegujú spracovaním náteru antiglobulínovým (anti-králičím) sérom označeným fluorochrómami. Vďaka tomu sa vytvára komplex mikróbov + antimikrobiálne králičie protilátky + protikráličie protilátky značené fluorochrómom. Tento komplex sa pozoruje vo fluorescenčnom mikroskope, ako pri priamej metóde.
Mechanizmus. Náter z testovaného materiálu sa pripraví na podložné sklíčko, zafixuje sa na plameň a spracuje sa imunitným zajačím sérom obsahujúcim protilátky proti antigénom patogénu. Na vytvorenie komplexu antigén-protilátka sa prípravok umiestni do vlhkej komory a inkubuje sa pri teplote 37 ° C počas 15 minút, potom sa dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného, \u200b\u200baby sa odstránili protilátky, ktoré sa neviažu na antigén. Potom sa na prípravok aplikuje fluorescenčné antiglobulínové sérum proti králičím globulínom, ktoré sa udržiava 15 minút pri 37 ° C a potom sa prípravok dôkladne premyje izotonickým roztokom chloridu sodného. V dôsledku väzby fluorescenčného antiglobulínového séra so špecifickými protilátkami fixovanými na antigéne sa vytvárajú svetelné komplexy antigén-protilátka, ktoré sa detegujú fluorescenčnou mikroskopiou.
4. Vo vzduchu v detskej izbe bolo nájdených 75 mt / m3 streptokoka, 12 mt / m3 stafylokoka a 1 mt / m3 tuberkulóznych baktérií. Vykonajte sanitárne a bakteriologické hodnotenie ovzdušia a načrtnite plán jeho reorganizácie.
VSTUPENKA NA SKÚŠKU č. _54
Retrovírusy. Infekcia HIV (AIDS) a jej pôvodcovia.
Vírus ľudskej imunodeficiencie spôsobuje infekciu HIV, ktorá vedie k rozvoju syndrómu získanej imunitnej nedostatočnosti.
Pôvodcom infekcie HIV je lymfotropný vírus patriaci do rodiny Retroviridae, rod Lentivirus.
Morfologické vlastnosti: vírus obsahujúci RNA. Sférická vírusová častica Obal pozostáva z dvojitej lipidovej vrstvy preniknutej glykoproteínmi. Lipidová membrána je odvodená z plazmatickej membrány hostiteľskej bunky, v ktorej sa vírus množí. Molekula glykoproteínu pozostáva z 2 podjednotiek umiestnených na povrchu viriónu a prenikajúcich cez jeho lipidovú membránu.
Kónické jadro vírusu pozostáva z kapsidových proteínov, množstva matricových proteínov a proteázových proteínov. Genóm vytvára dva reťazce RNA; pre proces reprodukcie má HIV reverznú transkriptázu alebo reverznú transkriptázu.
Genóm vírusu sa skladá z 3 hlavných štruktúrnych génov a 7 regulačných a funkčných génov. Funkčné gény vykonávajú regulačné funkcie a zabezpečujú implementáciu reprodukčných procesov a účasť vírusu na infekčnom procese.
Vírus ovplyvňuje hlavne T- a B-lymfocyty, niektoré bunky monocytovej série (makrofágy, leukocyty), bunky nervového systému.
Kultúrne vlastnosti: na bunkovej kultúre T-lymfocytov a ľudských monocytov (v prítomnosti IL-2).
Antigénna štruktúra: 2 typy vírusov - HIV-1 a HIV-2 HIV-1, má viac ako 10 genotypov (podtypov): A, B, C, D, E, F ..., líšiacich sa aminokyselinovým zložením bielkovín.
HIV-1 je rozdelený do 3 skupín: M, N, O. Väčšina izolátov patrí do skupiny M, v ktorej sa rozlišuje 10 podtypov: A, B, C, D, Fl, F-2, G, H, I, K. Rezistencia : Citlivý na fyzikálne a chemické faktory, pri zahriatí zomrie. Vírus môže dlho pretrvávať v sušenom stave, v sušenej krvi.
Faktory patogenity, patogenéza: Vírus sa viaže na lymfocyt, vstupuje do bunky a reprodukuje sa v lymfocyte. V dôsledku množenia HIV v lymfocytoch sa tieto lymfocyty zničia alebo stratia svoje funkčné vlastnosti. V dôsledku množenia vírusu v rôznych bunkách sa hromadí v orgánoch a tkanivách a nachádza sa v krvi, lymfe, slinách, moči, pote a stolici.
Pri infekcii HIV klesá počet T-4 lymfocytov, je narušená funkcia B lymfocytov, je potlačená funkcia prirodzených zabíjačských buniek a je znížená odpoveď na antigény a je narušená produkcia komplementu, lymfokínov a ďalších faktorov regulujúcich imunitné funkcie (IL), v dôsledku čoho dochádza k imunitnej dysfunkcii. systémov.
Klinika: je postihnutý dýchací systém (zápal pľúc, zápal priedušiek); Centrálny nervový systém (abscesy, meningitída); Vyskytujú sa gastrointestinálny trakt (hnačky), zhubné novotvary (nádory vnútorných orgánov).
Infekcia HIV prebieha v niekoľkých fázach: 1) inkubačná doba, priemerne 2 - 4 týždne; 2) štádium primárnych prejavov, ktoré sa najskôr vyznačuje akútnou horúčkou, hnačkou; štádium končí asymptomatickou fázou a perzistenciou vírusu, obnovením pohody, avšak protilátky HIV sa stanovujú v krvi, 3) štádium sekundárnych ochorení prejavujúcich sa poškodením dýchacieho a nervového systému. Infekcia HIV končí posledným, 4. terminálnym štádiom - AIDS.
Mikrobiologická diagnostika.
Virologické a sérologické štúdie zahŕňajú metódy na stanovenie antigénov a protilátok proti HIV. Na tento účel sa používajú ELISA, IB a PCR. Séra pacientov s HIV-1 a HIV-2 obsahujú protilátky proti všetkým vírusovým proteínom. Na potvrdenie diagnózy sa však stanovujú protilátky proti proteínom gp41, gpl20, gpl60, p24 v HIV-1 a protilátky proti proteínom gp36, gpl05, gpl40 v HIV-2. Protilátky proti HIV sa objavujú 2-4 týždne po infekcii a sú detekované vo všetkých štádiách HIV.
Metóda detekcie vírusu v krvi, lymfocytoch. Pre každý pozitívny test je však nastavená reakcia IB na potvrdenie výsledkov. Používa sa tiež PCR, ktorá je schopná zistiť infekciu HIV v inkubácii a v ranom klinickom období, ale jej citlivosť je o niečo nižšia ako citlivosť pri teste ELISA.
Klinické a sérologické diagnózy sú potvrdené imunologickými štúdiami, ak poukazujú na prítomnosť imunodeficiencie u vyšetrovaného pacienta.
Diagnostický enzýmovo viazaný imunosorbentný test na detekciu protilátok proti HIV - zahŕňa vírusové antigény adsorbované na nosiči, protilátky proti ľudskému Ig. Používa sa na sérodiagnostiku AIDS.
Liečba: použitie inhibítorov reverznej transkriptázy pôsobiacich v aktivovaných bunkách. Liečivá sú deriváty tymidínu - azidotymidín a fosfazid.
Prevencia Špecifické - č.
Vplyv fyzikálnych a chemických faktorov na mikróby. Mutácia a jej význam pre praktické lekárstvo. Príklady. Dôležitosť ekológie.
Pôsobenie chemických a biologických faktorov.
Pôsobenie chemických látok
Chemikálie môžu inhibovať alebo úplne inhibovať rast mikroorganizmov. Ak chemická látka brzdí množenie baktérií, ale po odstránení sa ich rast obnoví.
Antimikrobiálne látky, berúc do úvahy chemickú štruktúru a mechanizmus ich baktericídneho pôsobenia na baktérie, možno rozdeliť do nasledujúcich skupín: oxidanty, halogény, zlúčeniny kovov, kyseliny a zásady, povrchovo aktívne látky, alkoholy, farbivá, deriváty fenolu a formaldehydu.
Oxidačné činidlá. Do tejto skupiny patrí peroxid vodíka a manganistan draselný.
Halogény. Chlór, jód a ich prípravky: bielidlo, chlóramín B, pantocid, alkoholový roztok jódu 5%, jodinol, jodoform.
Zlúčeniny ťažkých kovov (soli olova, medi, zinku, striebra, ortuti; organokovové zlúčeniny striebra: protargol, collargol). Tieto zlúčeniny sú schopné pôsobiť tak antimikrobiálne, ako aj rôzne lokálne účinky na tkanivá makroorganizmu.
Kyseliny a zásady. Baktericídny účinok kyselín a zásad je založený na dehydratácii mikroorganizmov, zmene pH živného média, hydrolýze koloidných systémov a tvorbe kyslých alebo zásaditých albuminátov.
Farbivá majú vlastnosti, ktoré bránia množeniu baktérií. Sú pomalé, ale selektívnejšie.
Formaldehyd je bezfarebný plyn. V praxi sa používa 40% vodný roztok formaldehydu (formalínu). Plynný formaldehyd rozpustený vo vode má škodlivý účinok na vegetatívne a sporové formy baktérií.
Pôsobenie biologických faktorov
Pôsobenie biologických faktorov sa prejavuje predovšetkým v antagonizme mikróbov, keď odpadové produkty niektorých mikróbov spôsobujú smrť iných.
Antibiotiká (z gréckeho anti-against, bios - life) sú biologicky aktívne látky tvorené počas života húb, baktérií, živočíchov, rastlín a vytvárané synteticky, schopné selektívne potláčať a ničiť mikroorganizmy, huby, rickettsie, veľké vírusy, prvoky a jednotlivých helmintov.
3. Reakcia biologickej aktivity bakteriálnych enzýmov pri reumatizme, diagnostický a praktický význam, ochranná úloha protilátok proti enzýmom pri získanej imunite (stanovenie antihyaluronidázy a anti O-streptolyzínu).
Reumatizmus je bežné ochorenie infekčnej a alergickej povahy, pri ktorom je ovplyvnené spojivové tkanivo, hlavne kardiovaskulárny systém, rovnako ako kĺby, vnútorné orgány a centrálny nervový systém. Predpokladá sa, že príčinou rozvoja reumatizmu je aktivácia patogénnych mikroorganizmov, hlavne streptokokov beta-hemolytickej skupiny A. Je to on, kto má hlavnú úlohu v etiológii a patogenéze reumatických chorôb. Po prvé, choroba sa vyvíja na pozadí streptokokovej infekcie. Po druhé, v krvi pacientov sa nachádza veľké množstvo protilátok proti mikroorganizmom tejto skupiny. Po tretie, prevencia choroby sa úspešne uskutočňuje antibakteriálnymi liekmi.
Pri reumatoidnej artritíde synoviálne membrány z neznámych dôvodov vylučujú veľké množstvo enzýmu glukóza-6-fosfátdehydrogenázy, ktorý tiež ničí disulfidové väzby v bunkovej membráne. V tomto prípade dochádza k „úniku“ proteolytických enzýmov z bunkových lyzozómov, ktoré spôsobujú poškodenie blízkych kostí a chrupaviek. Telo na to reaguje produkciou cytokínov, medzi ktorými je aj tumor nekrotizujúci faktor α TNF-α. Kaskády reakcií v bunkách, ktoré sú spúšťané cytokínmi, príznaky ochorenia ešte zhoršujú. Chronický reumatoidný zápal spojený s TNF-α veľmi často spôsobuje poškodenie chrupavky a kĺbov, čo vedie k fyzickému postihnutiu.
Imunofluorescenčná reakcia, ktorú v roku 1942 objavil Koons, nie je novou výskumnou metódou. Avšak vznik hybridómových technológií, ktoré umožnili získať monoklonálne protilátky, dal tejto reakcii „druhý život“, pretože ich použitie umožnilo niekoľkokrát zvýšiť citlivosť tejto reakcie a jej špecifickosť.
A dnes vám podrobne povieme o reakcii priamej a nepriamej imunofluorescencie (RIF) ako diagnostickej metódy Koons pre dospelých mužov a žien počas tehotenstva.
Čo je to imunofluorescenčná reakcia
Imunofluorescenčná reakcia, ktorá poskytuje vynikajúcu príležitosť na rýchle získanie presnej diagnózy, vám umožňuje určiť prítomnosť pôvodcu ochorenia v patologickom materiáli. Na tento účel sa používa náter z materiálu, ktorý sa špeciálne spracováva pomocou značeného FITC (fluoresceínizotiokyanát), a skúma sa to ako heterogénna analýza.
Na získanie výsledku sa použije luminiscenčný mikroskop; v jeho optickom systéme je sada svetelných filtrov na zabezpečenie prípravku s modrofialovým alebo ultrafialovým svetlom s danou vlnovou dĺžkou. Táto podmienka umožňuje, aby sa fluorochróm odrážal v danom rozmedzí. Vedec hodnotí vlastnosti žiary, jej povahu, veľkosť objektov a ich vzájomnú polohu.
Komu je pridelený?
Na diagnostiku rôznych vírusových ochorení je možné použiť imunofluorescenčný test. Predovšetkým je predpísané pre komplexné vyšetrenie na identifikáciu nasledujúcich faktorov:
- prítomnosť vírusu v tele;
- infekcia salmonelou;
- existencia určitých antigénov v tele;
- je odhalená pravdepodobnosť infekcie tela chlamýdiami, mykoplazmami a inými mikroorganizmami, ktoré majú schopnosť vzrušovať ľudské vírusové ochorenia;
- diagnostika vírusových chorôb u zvierat.
Uvedené indikácie umožňujú použiť imunofluorescenčnú reakciu na detekciu vírusových chorôb rôznej povahy u ľudí a zvierat.
Ciele
Pretože táto diagnostická metóda má veľa výhod, ktoré by mali zahŕňať jej vysokú účinnosť, rýchlosť implementácie a získanie výsledku, ako aj absenciu veľkého množstva kontraindikácií, používa sa na stanovenie prítomnosti vírusových infekcií v tele. Preto môže byť táto analýza predpísaná tak na stanovenie, ako aj na objasnenie diagnózy, na základe ktorej je predpísaný liečebný režim.
Postup nespôsobuje nepríjemné pocity, je potrebné získať materiál na analýzu, ktorý sa odoberá z akejkoľvek telesnej tekutiny: sliny, spútum, škrabanie z povrchu slizníc. Na analýzu je možné odobrať aj krv. Frekvencia reakcie imunofluorescencie je predpísaná ošetrujúcim lekárom, ktorý potrebuje získať údaje o dynamike procesov prebiehajúcich v tele.
Pretože táto analýza nepoškodzuje telo ani celkový blahobyt človeka, možno ju podľa potreby predpísať.
Druhy takéhoto postupu
Dnes sa používa niekoľko druhov tejto analýzy, z ktorých každá má množstvo špecifických vlastností a umožňuje vám získať najpodrobnejší obraz o procesoch prebiehajúcich v tele.
Medzi typy imunofluorescenčných reakcií patria:
- - jeden z najrýchlejšie sa rozvíjajúcich typov diagnostiky, táto analýza umožňuje získať kvantitatívne údaje bez použitia sériových riedení. Pomocou získaných meraní optickej hustoty kvapaliny je možné presne určiť hladinu koncentrácie požadovanej zložky. Široké možnosti tohto typu analýzy sa využívajú pri použití monoklonálnych protilátok na jej implementáciu, ktorá umožňuje určiť fázu infekčného procesu, jeho závažnosť;
- DNA diagnostika - táto metóda je založená na komplementárnom viazaní nukleotidov, pre ktoré je možné použiť tekutiny ako sliny, krv, mozgovomiechový mok, moč, spútum, biopsie, krv. Táto metóda je najúčinnejšia pri detekcii prítomnosti papilomavírusov v tele, avšak mnoho moderných testovacích systémov môže príležitostne poskytnúť falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky. Môžu byť spôsobené kontamináciou kvapalných vzoriek na analýzu špecifickej DNA, ktorej prítomnosť môže byť vnorená alebo úplná;
- imunochromografia - špecifickosť tejto metódy na stanovenie prítomnosti patologického prostredia a vírusov v tele spočíva v použití označených protilátok počas reakcie. Táto diagnostická metóda sa používa na detekciu a stupeň aktivity procesu infekcie streptokokmi skupiny A, ako aj na chlamýdie nasledujúcich typov: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia od spoločnosti Oxoid. S najvyššou možnou citlivosťou testovacie systémy, ktoré sú založené na tejto metodike výskumu. sa zvyčajne používajú ako orientačný test.
Uvedené odrody majú zvláštnosti vykonávania a špecifické vlastnosti výsledkov, všetky sú však zamerané na získanie údajov o prítomnosti patologických mikroorganizmov a vírusov v tele, ako aj o miere ich reprodukcie a aktivity.
Indikácie pre
Imunofluorescenčnú reakciu možno predpísať na detekciu akéhokoľvek typu patologického prostredia v tele.
Pri vykonávaní tohto typu diagnózy sa určujú chlamýdie, trichomonády, gonokoky a rovnako ako lamblia všetkých typov. a a ďalšie choroby tiež vyžadujú RIF. Vymenovanie lekára na jeho vykonávanie je povinné.
Kontraindikácie pre
Pretože na uskutočnenie tejto reakcie ako testovacieho materiálu je potrebný akýkoľvek druh telovej tekutiny, ich odber nie je zvyčajne ťažký a neexistujú žiadne kontraindikácie pre uskutočnenie imunofluorescenčnej reakcie. Avšak počas tehotenstva a u detí mladších ako 6 mesiacov sa materiál na výskum vykonáva s maximálnymi preventívnymi opatreniami.
Absencia kontraindikácií umožňuje vykonať tento typ diagnózy, keď lekár predpíše všetkých pacientov. Jeho bezpečnosť je zaručená použitím dezinfikovaných nástrojov a jednorazových injekčných striekačiek.
Príprava na postup
Odber materiálu pre túto analýzu nie je nijako zvláštny. Krv sa pre neho odoberá na prázdny žalúdok, aby v ňom nebol zvýšený obsah látok, ktoré môžu zmeniť pravdivé hodnoty a poskytnúť nepravdivý obraz.
Ako sa odoberá vzorka
Pretože na analýzu nie je potrebný žiadny špeciálny prípravok, je vylúčený iba príjem potravy 12 hodín pred ňou a absencia liekov, odoberie sa vzorka ako bežný proces odoberania tekutín z tela.
Subjektívne pocity počas procedúry sa môžu líšiť v závislosti od citlivosti.
Dekódovanie výsledkov
Použitie moderných testovacích systémov umožňuje získať najpresnejšie výsledky analýz. Na dešifrovanie výsledku sa používajú nasledujúce údaje:
- stupeň intenzity fluorescencie;
- odtieň fluorescencie;
- periférna povaha procesu žiarenia objektu;
- charakteristiky morfológie, lokalizácia patogénu v odobratom nátere testovaného materiálu a jeho veľkosť.
Počas štúdia veľkých predmetov (napríklad záhradná záhrada, Trichomonas, bunky, ktoré sú už infikované vírusmi) umožňujú vyššie uvedené kritériá najspoľahlivejšie výsledky. Avšak elementárne telieska mykoplazmy a chlamýdií majú rozmery, ktoré ležia na hranici rozlišovacej schopnosti luminiscenčného mikroskopu, čo sťažuje
nedostáva presný výsledok, pretože periférna žiara stráca časť svojej intenzity. Zvyšné kritériá už nie sú dostatočné na presnú identifikáciu študovaných mikroorganizmov. Z tohto dôvodu sú na odborníkov, ktorí uskutočňujú tento typ výskumu, kladené špeciálne požiadavky: úroveň ich kvalifikácie musí byť dostatočná na to, aby fungovali s dostupnými údajmi.
Z tohto dôvodu môže dekódovanie získanej analýzy zvládnuť iba lekár s príslušnou kvalifikačnou úrovňou. Prečítajte si o cene výskumu pomocou metódy RIF nižšie.
priemerná cena
Náklady na uskutočnenie imunofluorescenčnej reakcie závisia od umiestnenia a úrovne lekárskeho ústavu, ako aj od kvalifikácie špecialistu, ktorý vykonáva analýzu. Dnes sa náklady pohybujú od 1280 do 2 160 rubľov.
Video nižšie vám povie viac o imunologických reakciách:
Pri primárnom syfilise sa na bledý treponém vyšetruje výtok z pevného chancru alebo bodkovača lymfatických uzlín. V prípade sekundárneho syfilisu sa materiál odoberá z povrchu erodovaných papuliek na koži, slizniciach, z prasklín atď. chlorid sodný alebo predpísať pleťové vody s rovnakým roztokom. Vyčistený povrch sa vysuší suchým tampónom a platinová slučka alebo špachtľa mierne podráždi periférne oblasti, zatiaľ čo prstami v gumovej rukavici mierne stlačíte základňu prvku, až kým sa neobjaví tkanivová tekutina (sérum), z ktorej sa pripravuje príprava na výskum. Príjem intersticiálnej tekutiny je dôležitý pre diagnostiku syfilisu, pretože bledé treponémy sa nachádzajú v lúmenoch lymfatických kapilár, v tkanivových medzerách okolo lymfatických a krvných ciev.
Punkcia regionálnych lymfatických uzlín
Koža nad lymfatickými uzlinami je ošetrená 96% alkoholom a 3 - 5% alkoholovým roztokom jódu. Potom 1 a 2 prsty ľavej ruky zafixujú lymfatickú uzlinu. Pravou rukou vezmite sterilnú injekčnú striekačku s niekoľkými kvapkami izotonického roztoku chloridu sodného, \u200b\u200bktorá sa vstrekuje rovnobežne s pozdĺžnou osou lymfatickej uzliny. Ihla sa zatlačí v rôznych smeroch na opačnú stenu montážnej kapsuly a pomaly sa vstrekuje obsah striekačky. Lymfatická uzlina je ľahko masírovaná prstami ľavej ruky. Pri pomalom vytiahnutí ihly sa piest injekčnej striekačky súčasne predĺži a odsaje obsah lymfatických uzlín. Materiál sa nanesie na sklenené podložné sklíčko (s malým množstvom materiálu sa pridá kvapka izotonického roztoku chloridu sodného), ktoré sa zakryje krycím sklom. Štúdium natívneho prípravku sa uskutočňuje v tmavom zornom poli pomocou svetelného optického mikroskopu s kondenzátorom tmavého poľa (objektív 40, 7x, 10x alebo 15x). Bledé treponémy nájdete aj vo farbených prípravkoch. Ak sú zafarbené podľa Romanovského-Giemsy, bledé treponémy sa sfarbujú do ružova, podľa Fontana a Morozova na hnedé (čierne); podľa Burriho metódy sa nezafarbené treponémy objavujú na tmavom pozadí.Sérologická diagnostika
Pri diagnostike syfilisu, pri hodnotení účinnosti liečby, pri stanovení kritéria liečby, pri identifikácii skrytých rezistentných foriem sú pripojené štandardné (klasické) a špecifické sérologické reakcie. Štandardné alebo klasické sérologické testy (CSR) zahŕňajú:- Wassermanova reakcia (RV),
- sedimentárne reakcie Kahna a Sachs-Vitebska (cytocholické),
- reakcia na skle (expresná metóda),
- reakcia imobilizácie bledých treponém (RIBT),
- reakcia imunofluorescencie (RIF).
Wassermanova reakcia (RV)
- vyvinuli A. Wasserman spolu s A. Neisserom a C. Bruckom v roku 1906. Wassermanova reakcia je založená na fenoméne väzby komplementu (Bordet-Zhanguova reakcia) a umožňuje detekciu anti-lipidových protilátok (reagínov). Podľa moderných koncepcií sa protilátky proti lipidom makroorganizmu stanovujú vo Wassermanovej reakcii, nie na bledom treponeme, a reakcia odhalí autoimunitný proces, ktorý je spôsobený denaturáciou bledého treponému v tkanivách makroorganizmu s tvorbou lipoproteínového komplexu (konjugátu), v ktorom sú určujúce lipidy (haptény).Zvyčajne sa RV podáva s dvoma alebo tromi antigénmi. Najčastejšie sa používa vysoko citlivý kardiolipínový antigén (extrakt z hovädzieho srdca obohatený o cholesterol a lecitín) a treponemálny antigén (suspenzia anatogénnych kultúrnych bledých treponém ošetrená ultrazvukom). Tieto antigény tvoria spolu s reaktínmi v krvnom sére pacienta imunitný komplex schopný adsorpcie a viazania komplementu. Na vizuálne stanovenie vytvoreného komplexu (reagíny + antigén + komplement) sa ako indikátor používa hemolytický systém (zmes ovčích erytrocytov s hemolytickým sérom). Ak je vo fáze 1 reakcie asociovaný komplement (reagíny + antigén + komplement), nedochádza k hemolýze - erytrocyty sa vyzrážajú do ľahko viditeľného sedimentu (PB pozitívny). Ak sa komplement neviaže vo fáze 1 z dôvodu neprítomnosti reagínov v testovanom sére, použije ho hemolytický systém a dôjde k hemolýze (PB negatívny). Závažnosť hemolýzy pri stanovení RV sa hodnotí podľa výhod: úplná absencia hemolýzy ++++ alebo 4+ (RV je výrazne pozitívna); sotva začatá hemolýza +++ alebo 3+ (PB pozitívna); významná hemolýza ++ alebo 2+ (PB je slabo pozitívny); nepochopiteľný obraz hemolýzy ± (PB je pochybné); úplná hemolýza - (Wassermanova negatívna reakcia).
Okrem kvalitatívneho stanovenia RV existuje kvantitatívna formulácia s rôznymi zriedeniami séra (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titer reagínov je určený maximálnym zriedením, ktoré stále poskytuje výrazne pozitívny výsledok (4+). Kvantitatívne nastavenie RV je dôležité pri diagnostike niektorých klinických foriem syfilitickej infekcie, ako aj pri monitorovaní účinnosti liečby. V súčasnosti je Wassermanova reakcia vystavená dvomi antigénmi (Reiterov kmeň znel kardiolipín a treponemal). Spravidla sa RV stáva pozitívnym 5-6 týždňov po infekcii u 25-60% pacientov, za 7-8 týždňov - u 75-96%, za 9-19 týždňov - u 100%, aj keď v posledných rokoch niekedy skôr alebo neskôr ... Zároveň sa titer reagínov postupne zvyšuje a dosahuje maximálnu hodnotu (1: 160 - 1: 320 a viac) v prípade výskytu generalizovaných vyrážok (sekundárny čerstvý syfilis). Ak je RV pozitívna, stanoví sa diagnóza primárneho séropozitívneho syfilisu.
So sekundárnym čerstvým a sekundárne sa opakujúci syfilis je RV pozitívna u 100% pacientov, ale u podvyživených pacientov so zníženou imunitou možno pozorovať negatívny výsledok. Následne titer reagínov postupne klesá a pri sekundárne sa opakujúcom syfilise zvyčajne nepresahuje 1: 80-1: 120.
S terciárnym syfilisom RV je pozitívna u 65 - 70% pacientov a zvyčajne je u nich nízky titer reaktínov (1: 20–1: 40). V neskorých formách syfilisu (syfilis vnútorných orgánov, nervového systému) sa pozitívna RV pozoruje v 50-80% prípadov. Titer reagínov sa pohybuje od 1: 5 do 1: 320.
S latentným syfilisom pozitívna RV sa pozoruje u 100% pacientov. Titer reagínov je od 1:80 do 1: 640, u neskorého latentného syfilisu od 1:10 do 1:20. Rýchly pokles titra reakčných látok (až do úplnej negativity) počas liečby naznačuje účinnosť liečby.
Nevýhody Wassermanovej reakcie - nedostatok citlivosti (v počiatočnom štádiu negatívneho primárneho syfilisu). Negatívny je aj u 1/3 pacientov, ak boli v minulosti liečení antibiotikami, u pacientov s terciárnym aktívnym syfilisom s léziami na koži a slizniciach, osteoartikulárnom aparáte, vnútorných orgánoch, centrálnom nervovom systéme, s neskorým vrodeným syfilisom.
Nedostatok konkrétnosti - Wassermanova reakcia môže byť pozitívna u osôb, ktoré predtým neboli choré alebo nemali syfilis. Najmä falošne pozitívne (nešpecifické) výsledky RV sa pozorujú u pacientov trpiacich systémovým lupus erythematosus, malomocenstvom, maláriou, malígnymi novotvarmi, poškodením pečene, rozsiahlym infarktom myokardu a inými chorobami a niekedy u úplne zdravých ľudí.
Zistila sa krátkodobá falošne pozitívna Wassermanova reakcia u niektorých žien pred pôrodom alebo po ňom, u drogovo závislých osôb, po anestézii, požití alkoholu. Falošne pozitívna RV je spravidla slabá, častejšie s nízkym titrom reagínov (1: 5-1: 20), pozitívna (3+) alebo slabo pozitívna (2+). Pri hromadných sérologických vyšetreniach je frekvencia falošne pozitívnych výsledkov 0,1-0,15%. Na prekonanie nedostatočnej citlivosti používajú nastavenie v chlade (Collarova reakcia) a súčasne sa uskutočňujú ďalšie sérologické reakcie.
Sedimentárne reakcie Kahna a Sachs-Vitebského
Wassermanova reakcia sa používa v kombinácii s dvoma sedimentárne reakcie (Kahn a Sachsa-Vitebsky), keď sú pripravené, pripravia sa koncentrovanejšie antigény. Expresná metóda (mikroreakcia na skle) - označuje lipidové reakcie a je založená na precipitačnej reakcii. Zavádza sa so špecifickým kardiolipínovým antigénom, ktorého 1 kvapka sa zmieša s 2–3 kvapkami testovaného krvného séra v jamkách špeciálnej sklenenej platne.Výhoda - rýchlosť prijatia odpovede (po 30-40 minútach). Výsledky sa posudzujú podľa množstva zrážok a veľkosti vločiek. Závažnosť je definovaná ako DAC - 4+, 3+, 2+ a záporná. Je potrebné poznamenať, že falošné poplachy sú bežnejšie ako u RV. Expresná metóda sa spravidla používa na hromadné vyšetrenia na syfilis počas vyšetrenia v klinických diagnostických laboratóriách, somatických oddeleniach a nemocniciach. Na základe výsledkov expresnej metódy je diagnostika syfilisu zakázaná, jeho použitie u tehotných žien, darcov a tiež na kontrolu po liečbe je vylúčené.
Imobilizačná reakcia Treponema pallidum (RIBT)
Imobilizačná reakcia Treponema pallidum (RIBT)- navrhli v roku 1949 R.W. Nelson a M.Mayer. Je to najšpecifickejší diagnostický test na syfilis. Zložitosť a vysoké náklady na nastavenie však obmedzujú jeho aplikáciu. V krvnom sére pacientov sa stanovujú videošpecifické protilátky (imobilizíny), ktoré vedú k nehybnosti bledých treponém v prítomnosti komplementu. Antigén je živý patogénny bledý treponém vylučovaný z králikov infikovaných syfilisom. Pomocou mikroskopu sa spočítajú bledé treponémy, ktoré stratili svoju pohyblivosť (imobilizované), a vyhodnotia sa výsledky RIBT: imobilizácia bledých treponém z 51 na 100% - pozitívna; od 31 do 50% - slabo pozitívny; od 21 do 30% - pochybné; od 0 do 20% - negatívne.Na RIBT záleží v diferenciálnej diagnostike na rozlíšenie falošne pozitívnych sérologických reakcií od reakcií spôsobených syfilisom. Neskoré sa stáva pozitívnym než RV, RIF a teda na diagnostiku infekčných foriem syfilisu sa nepoužíva, aj keď v sekundárnom období syfilisu je pozitívny u 85-100% pacientov.
V terciárnom období syfilisu s poškodením vnútorných orgánov, pohybového aparátu, nervového systému je RIBT pozitívny v 98-100% prípadov ( RV je často negatívna).
Je potrebné pamätať na to, že RIBT sa môže v testovanom sére ukázať ako falošne pozitívny v prítomnosti treponemicídnych liekov (penicilín, tetracyklín, makrolity atď.), Ktoré spôsobujú nešpecifickú imobilizáciu bledých treponém. Na tento účel sa krv na RIBT vyšetrí najskôr 2 týždne po ukončení užívania antibiotík a iných liekov.
RIBT, ako aj RIF v priebehu liečby sú pomaly negatívne ovplyvnené, preto sa v priebehu liečby nepoužíva ako kontrola.
Imunofluorescenčná reakcia (RIF)
Imunofluorescenčná reakcia (RIF) - vyvinuté v roku 1954 A. Coonsom a prvýkrát ho na diagnostiku syfilitickej infekcie použil Deacon, Falcone, Harris v roku 1957. RIF je založený na nepriamej metóde stanovenia fluorescenčných protilátok. Antigénom na stanovenie štádia sú tkanivovo patogénne svetlé treponémy fixované na sklenené podložné sklíčka, na ktoré sa nanáša testovacie sérum. Ak študované sérum obsahuje protilátky proti treponému súvisiace s IgM a IgG, pevne sa viažu na antigén - treponémy, ktorý sa deteguje v luminiscenčnom mikroskope pomocou anti-druhového („anti-ľudského“) fluorescenčného séra.Výsledky RIF sa berú do úvahy intenzitou luminiscencie bledých treponém v prípravku (žltozelená žiara). Pri absencii anti-treponemálnych protilátok v sére sa bledé treponémy nezistia. V prítomnosti protilátok sa deteguje žiara bledých treponém, ktorých stupeň je vyjadrený v plusoch: 0 a 1+ - negatívna reakcia; od 2+ do 4+ - pozitívne.
RIF sa týka skupinových treponemálnych reakcií a je zriedený testovaným sérom 10 a 200 krát (RIF-10 a RIF-200). RIF-10 sa považuje za citlivejší, avšak nešpecifické pozitívne výsledky často vypadávajú ako pri RIF-200 (má vyššiu špecificitu). Zvyčajne RIF sa stáva pozitívnym skôr ako RV - pozitívny u primárneho séronegatívneho syfilisu u 80% pacientov, u 100% v sekundárnom období syfilisu, vždy pozitívny u latentného syfilisu a v 95-100% prípadov v neskorých formách a vrodených syfilisoch.
Špecifickosť RIF sa zvyšuje po predbežnom ošetrení študovaného séra sorbentovo-ultrazvukovým treponemálnym antigénom, ktorý viaže skupinové protilátky (RIF - abs).
Indikácie pre nastavenie RIBT a RIF - diagnostika latentného syfilisu na potvrdenie špecifickosti komplexu lipidových reakcií v prípade predpokladu syfilitickej infekcie na základe pozitívneho RV Pozitívne RIBT a RIF sú dôkazom latentného syfilisu. V prípade falošne pozitívnej RV pri rôznych ochoreniach (systémový lupus erythematosus, malígne neoplazmy atď.) A ak sú opakované výsledky RIBT a RIF negatívne, znamená to nešpecifickú povahu RV. Podozrenie na neskoré syfilitické lézie vnútorných orgánov, pohybového aparátu, nervového systému v prítomnosti negatívnej RV u pacientov. Podozrenie na primárny séronegatívny syfilis, keď u pacientov s opakovanými štúdiami erózneho (vredového) výtoku z povrchu s bodkovaním zo zväčšených regionálnych lymfatických uzlín sa bledý treponém nezistí - v tomto prípade sa umiestni iba RIF-10.
Pri vyšetrovaní osôb s negatívnou RVktorí mali dlhodobé sexuálne kontakty a kontakty v domácnosti s pacientmi so syfilisom, vzhľadom na pravdepodobnú možnosť ich liečby v nedávnej minulosti antisyfilitikami, ktoré spôsobovali negatívny RV. Enzýmová imunotest (ELISA, ELISA - enzymatická imunoanalýza) - metóda vyvinutá E. Engvallom a kol., S. Avramesom (1971). Podstata spočíva v kombinácii syfilitického antigénu absorbovaného na povrchu nosiča v pevnej fáze s protilátkou analyzovaného krvného séra a detekcie špecifického komplexu antigén-protilátka pomocou enzýmovo značeného anti-druhovo imunitného krvného séra. To umožňuje vizuálne vyhodnotiť výsledky testu ELISA podľa stupňa zmeny farby substrátu pôsobením enzýmu obsiahnutého v konjugáte. Môžu sa vyskytnúť nepresné výsledky testu ELISA v dôsledku nedostatočného zriedenia zložiek, porušenia teplotných a časových režimov, nezhody pH roztokov, kontaminácie laboratórneho skla a nesprávnej techniky umývania nosiča.
Pasívna hemaglutinačná reakcia (RPHA)
Ako diagnostický test na syfilis navrhol T. Rathlev (1965, 1967), T. Tomizawa (1966). Makromodifikácia reakcie sa nazýva TRNA, mikromodifikácia - MNA-TR, automatizovaná verzia - AMNA-TR, reakcia s polymočovinovými makrokapsulami namiesto erytrocytov - MCA-TR. Citlivosť a špecifickosť RPHA sú podobné ako v prípade RIBT, RIF, ale RPHA je menej citlivá v počiatočných formách syfilisu v porovnaní s RIF-abs a vyššia v neskorých formách s vrodeným syfilisom. RPGA sa uvádza v kvalitatívnej a kvantitatívnej verzii.Technika odberu krvi na sérologické testy
Pri výskume RV, RIF, RIBT sa krv odoberá z lakťovej žily nalačno alebo najskôr 4 hodiny po jedle sterilnou injekčnou striekačkou alebo jednou ihlou (samospádom). V mieste odberu je pokožka predbežne ošetrená 70% alkoholom. Injekčná striekačka a ihla sa majú prepláchnuť izotonickým roztokom chloridu sodného. 5-7 ml testovanej krvi sa naleje do čistej suchej studenej skúmavky. Na skúmavku je nalepený čistý papier s priezviskom pacienta, iniciálkami, číslom anamnézy alebo ambulantnou kartou, dátumom odberu krvi. Po odbere krvi sa skúmavka umiestni do chladničky s teplotným režimom + 4 ° + 8 ° C do druhého dňa. Na druhý deň sa sérum vypustí na výskum. Ak sa nasledujúci deň krv nepoužije, musí sa sérum z zrazeniny vypustiť a uchovávať v chladničke nie dlhšie ako 1 týždeň. Na výskum RIBT musí byť tuba špeciálne pripravená a sterilná. V prípade porušenia pravidiel na odber krvi na výskum môže nedodržanie podmienok skresliť výsledky.Neodporúča sa odoberať vzorky krvi na výskum po jedle, alkohole, rôznych liekoch, po podaní rôznych vakcín, počas menštruačného cyklu u žien.
Pri výskume expresnej metódy sa krv odoberala z hrotu prsta, ako sa to robí pri odbere ESR, ale krv sa odoberá o 1 kapiláru viac. Expresnú metódu je možné vykonať aj s krvným sérom získaným pomocou venepunkcie. Ak je potrebné testovať krv vo vzdialených laboratóriách, je možné namiesto krvi poslať suché sérum. Za týmto účelom sa nasledujúci deň po odbere krvi oddelí sérum od zrazeniny a natiahne do sterilnej injekčnej striekačky v množstve 1 ml. Potom sa sérum naleje vo forme 2 samostatných kruhov na pásik hrubého papiera na písanie (voskový papier alebo celofán) s rozmermi 6x8 cm. Na voľný okraj papiera je napísané priezvisko, iniciály subjektu a dátum odberu krvi. Chráňte papier sérom pred priamym slnečným žiarením a nechajte pri izbovej teplote do druhého dňa. Sérum vysychá vo forme malých kruhov lesklého žltkastého sklovitého filmu. Potom sa prúžky papiera so sušeným sérom zrolujú ako prášok z lekárne a odošlú sa do laboratória s uvedením diagnózy a na aký účel sa vyšetruje.
Sérologický odpor
U niektorých (2% alebo viac) pacientov so syfilisom napriek plnohodnotnej anti-syfilitickej liečbe dochádza k spomaleniu (absencii) negatívnych sérologických reakcií po ukončení liečby až na 12 mesiacov alebo viac. Existuje takzvaná sérologická rezistencia, ktorá sa v posledných rokoch stáva často pozorovanou. Existujú formy sérologickej rezistencie:- Pravdaže (absolútne, bezpodmienečné) - je potrebné vykonať ďalšiu anti-syfilitickú liečbu kombinovanú s nešpecifickou terapiou na zvýšenie imunitných síl tela.
- Relatívne - po úplnom ošetrení tvoria bledé treponémy cysty alebo L-formy, ktoré sú v tele v nízko virulentnom stave a následkom toho ďalšia liečba nezmení ukazovatele sérologických reakcií, najmä RIF a RIBT.
Pseudorezistencia - po liečbe napriek pozitívnym sérologickým reakciám v tele chýba bledý treponém. V tele nie je žiadny antigén, ale tvorba protilátok pokračuje, čo sa zaznamená, keď sa nastavia sérologické reakcie.
Sérologická rezistencia sa môže vyvinúť v dôsledku:
- nedostatočná liečba bez ohľadu na lekársky predpis a štádium ochorenia;
- nedostatočná dávka, a to najmä z dôvodu nezohľadnenia telesnej hmotnosti pacientov;
- porušenie intervalu medzi podaním liekov;
- zachovanie bledých treponém v tele napriek plnohodnotnej špecifickej liečbe v dôsledku ich rezistencie na penicilín a iné chemoterapeutické lieky v prítomnosti skrytých uzavretých lézií vo vnútorných orgánoch, nervovom systéme, lymfatických uzlinách, ktoré sú pre antibakteriálne lieky neprístupné (bledé treponémy sa často vyskytujú v tkanivách jazvy mnoho rokov po ukončení liečby, v lymfatických uzlinách je niekedy možné zistiť bledý treponém 3-5 rokov po anti-syfilitickej liečbe);
- zníženie obranyschopnosti pri rôznych chorobách a intoxikáciách (endokrinopatie, alkoholizmus, drogová závislosť atď.);
- všeobecné vyčerpanie (konzumácia potravy chudobnej na vitamíny, bielkoviny, tuky).
- sprievodné nešpecifické ochorenia vnútorných orgánov, poruchy kardiovaskulárneho systému, reumatizmus, dysfunkcie endokrinného a nervového systému, ťažké chronické dermatózy, zhubné novotvary;
- lézie nervového systému (ťažké traumy, otrasy mozgu, psychické traumy);
- tehotenstvo; chronická intoxikácia alkoholom, nikotínovými liekmi; infekčné choroby (malária, tuberkulóza, vírusové hepatitídy, úplavica, týfus, týfus a recidivujúca horúčka).
Priame spôsoby
Mikroskopia tmavého poľa
Bledé treponémy nemôžu rásť na živných médiách a nie sú vizualizované pod svetelným mikroskopom. Pretože detekcia patogénu pomocou konvenčnej mikroskopie je nemožná, používa sa špeciálny mikroskop s tmavým poľom, kde je patogén viditeľný vo forme špirály na tmavom pozadí.
Na mikroskopiu sa z lézie podozrivej na chorobu odoberá biomateriál. Mikroskopia v tmavom poli je možným spôsobom na hodnotenie kožných lézií, ako je chancre primárneho syfilisu alebo kondylómy sekundárneho syfilisu. Ak je materiál makulopapulárneho ohniska suchý, vyšetrí sa aspirát lymfatických uzlín.
Negatívny výsledok nevylučuje patologický proces, štatistická identifikácia patogénu je možná iba v 80%.
Diagnostika PCR
Reakcia zameraná na viacnásobné zvýšenie DNA treponema pallidum nám umožňuje dospieť k záveru o infekcii syfilisom alebo jeho neprítomnosti.
Akýkoľvek biomateriál na analýzu môže byť: krv, obsah syfilidu, mozgovomiechový mok atď. Test je vhodný na inkubačné obdobie.
PCR je úplne špecifická.
Nepriame sérologické testovanie na syfilis: treponemálne a netreponemálne testy
Sérologické testy (DAC alebo komplex sérologických reakcií) sa považujú za najbežnejší spôsob diagnostiky všetkých štádií syfilisu. Rozlišujú sa tieto reakcie:
- aglutinácia;
- zrážky;
- imunofluorescencia;
- enzýmová imunotest atď.
Sérologické testy na syfilis sa tiež delia na treponemálne a netreponemálne.
Netreponemálne
Ak existuje podozrenie na získaný syfilis, vykoná sa skríningové vyšetrenie, na ktoré sa používa netreponemálne testy detekcia protilátok proti lipoidným antigénom tkanív hostiteľa alebo patogénu v rôznych modifikáciách. V Ruskej federácii sa bežne vykonáva mikroprecipitačná reakcia (RMP), ktorá umožňuje detekciu protilátok proti bunkám poškodeným patogénom v krvi. Spoľahlivosť skríningu je vysoká, ale špecifickosť je nízka, takže testovanie je vhodné na preventívne účely pre prvotné hromadné skríningy.
Citlivosť rýchlych testov sa odhaduje na 78-86% pre primárny syfilis, 100% pre sekundárny syfilis a 95-98% pre terciárny syfilis.
Špecifickosť - od 85 do 99%, niekedy menej, ktorá sa vyskytuje za nasledujúcich podmienok:
- tehotenstvo;
- menštruácia;
- onkológia;
- choroby spojivového tkaniva;
- vírusové ochorenia;
- ochorenie pečene;
- očkovanie;
- „Čerstvý“ MI;
- týfus a pod.
Navyše prebytočný tuk v strave, pitie alkoholických nápojov a užívanie určitých liekov môže viesť k falošným pozitívam.
Výsledky skríningových testov sa stanú pozitívnymi 1 - 2 týždne po vytvorení kanála. Testy bez treponému sú negatívne po určitom čase po liečbe. V stave HIV môžu byť netreponemálne protilátky detegované dlho, niekedy počas celého života (o čom svedčia výsledky vhodnej randomizovanej štúdie).
Ďalšie typy netreponemálnych testov: VDRL, Plasmoreagin Test (RPR), Toluidínová červeň, Cardiolipin Antigen Complement Binding Test (CACk).
Wassermanova reakcia (RW)
Väzba komplementu je reakcia imunitného systému na infekciu, výsledok sa líši od negatívnych (kladené „-“) po prudko pozitívnych „++++“ alebo 4 plusov.
V počiatočnom štádiu primárneho syfilisu je RW negatívny.
Treponemal
Kvôli možnému výskytu falošne pozitívnych výsledkov na potvrdenie pozitívneho alebo nejednoznačného výsledku bez treponémy, použite treponemálne testy:
- imunofluorescenčná reakcia (RIF);
- hemaglutinácia (RPHA),
- enzýmová imunotest (ELISA) pre imunoglobulíny triedy G (IgG) a imunoglobulín M (IgM);
- imunoblotovanie;
- RIBT / RIT (reakcia imobilizácie bledých treponém).
Treponemálne testy sa nepoužívajú na hodnotenie účinnosti liečby.
RIF na stanovenie treponemálnych protilátok triedy IgG sa používa po pozitívnom výsledku expresných testov (citlivosť 84% pre primárny syfilis a 100% pre ďalšie štádiá, špecificita 96%). Neplatí pre diagnostiku u novorodencov.
Niektoré laboratóriá používajú „reverzné“ skríningové testy.
CDC (Centers for Disease Control and Prevention, USA) odporúča tradičné štúdie s kvantitatívnymi netreponemálnymi testami, ak je výsledok pozitívny, vykoná sa liečba.
Imunofluorescenčná reakcia (RIF)
Na odobratý materiál sa aplikuje sérum s fluorochrómom označenými protilátkami špecifickými pre antigén treponému, patogén k sebe priláka imunitné komplexy, a preto začne svietiť v luminiscenčnom mikroskope.
Pasívna hemoaglutinačná reakcia alebo RPHA
Pred objavením sa hemaglutinácie (adhézie) erytrocytov by mali od okamihu zavedenia bledého treponému uplynúť najmenej 4 týždne.
Pripravené erytrocyty s fixovanými proteínovými frakciami patogénu interagujú s plazmou, ak existujú protilátky proti syfilisu, dôjde k reakcii.
Vhodné na potvrdenie ktoréhokoľvek štádia ochorenia.
Prepojený imunosorbentný test
Je založená na reakcii antigén-protilátka. Detegujú sa protilátky rôznych tried, ktoré sa dajú kvantifikovať.
Získané výsledky nám umožňujú posúdiť trvanie patologického procesu, úspešnosť liečby, imunologický stav, aktivitu patogénov.
Imunoblotovanie je typ testu ELISA, ktorý sa používa na hĺbkovú diagnostiku všetkých sporných výsledkov.
Citlivosť a špecificita sa blíži k 100%, čo je dnes na identifikáciu proteínov ultravysoká metóda.
RIBT
Metóda je založená na reakcii antigén-protilátka. Ako antigén slúžia bledé treponémy kultivované v králičích semenníkoch. Pri interakcii s protilátkami infikovanej osoby strácajú patogény svoju pohyblivosť. Odozva sa hodnotí pomocou mikroskopie v tmavom poli.
Poznámka
RIBT sa v súčasnosti používa menej často kvôli svojej pracnosti, ale analýza môže byť užitočná na riešenie kontroverzných problémov (falošne pozitívne reakcie na syfilis).
Odlišná diagnóza
Najväčším problémom je diagnostika terciárneho syfilisu, ktorý je spôsobený príznakmi z kardiovaskulárneho a nervového systému, ako aj prejavmi z pokožky.
Pacienti musia byť vyšetrení na a.
Uvádzame zoznam chorôb, s ktorými sa diferenciálna diagnostika vykonáva pri syfilise:
- dermatologické prejavy;
- genitálne bradavice ();
- donovanóza;
- lymphogranuloma venereum;
- vírus;
- zatočí.
Ako sa začína diagnostika syfilisu?
Spočiatku sa s pacientom vedie rozhovor, počas ktorého sa objasnia podrobnosti: kedy došlo k podozrivému sexuálnemu kontaktu a aké sú sťažnosti.
Po odbere anamnézy pristúpia k fyzikálnemu vyšetreniu, osobitná pozornosť sa venuje oblasti genitálií a konečníka, slizniciam a lymfatickým uzlinám. Predbežná diagnóza už môže byť stanovená. Konečné overenie sa uskutoční pomocou laboratórnych testov.
Ak hovoríme jednoducho o komplexe, potom niektoré analýzy odhalia pôvodcu syfilisu, zatiaľ čo iné odrážajú reakciu tela na zavedenie bledého treponému.
Na stanovenie konečnej diagnózy je potrebné RPHA doplniť o 1 treponemálnu a 1 netreponemálnu analýzu.
Diagnóza syfilisu u tehotných žien
Počas tehotenstva sa povinné testovanie na syfilis vykonáva niekoľkokrát.
Odporúčanie na analýzu DAC sa vydá počas prvej návštevy ženy na konzultácii a vyšetrenie sa uskutoční trikrát počas tehotenstva. Osobitnú pozornosť treba venovať pacientom z vysoko rizikovej skupiny so zaťaženou anamnézou: asociálni, závislí atď.
Ak sú výsledky testu pozitívne, vykoná sa hlbšia diagnostika a podľa indikácií sa predpíše liečba, ktorá závisí od štádia a klinických prejavov.
Diagnóza vrodeného syfilisu
Väčšina detí sa narodí neliečeným matkám alebo tým, ktoré dostali terapiu príliš neskoro.
Treponemálne testy s použitím novorodeneckého séra sa neodporúčajú z dôvodu pasívneho prenosu IgG protilátok. Všetky deti narodené matkám so syfilisom by mali byť vyšetrené kvantitatívnym netreponemálnym sérologickým testom (RPR alebo VDRL) vykonaným s použitím novorodeneckého séra.
Ako interpretovať výsledky sérologických testov
Mikroprecipitačná reakcia, RIF a RPHA sú negatívne - norma, pozitívne - potvrdenie syfilisu.
Mikroprecipitačná reakcia je negatívna, ostatné sú pozitívne - anamnéza syfilisu po špecifickej liečbe alebo neskoré štádium.
Negatívny RIF s pozitívnou RPHA a mikroprecipitačnou reakciou - výsledkom je pochybné, opakované komplexné hodnotenie.
Negatívny výsledok RIF a mikroprecipitácie, ale pozitívny RPHA je stav po úspešnej antibiotickej liečbe alebo falošne pozitívny výsledok.
Pozitívny RIF s negatívnymi RPHA a mikroprecipitačnými reakciami - počiatočné štádium, liečba alebo nespoľahlivosť výsledku.
Pozitívnou mikroprecipitačnou reakciou, ktorú nepotvrdzuje ani RPHA, ani RIF, je neprítomnosť syfilisu.
Inštrumentálny výskum syfilisu
Inštrumentálna diagnostika sa vykonáva v závislosti od postihnutia orgánov. Napríklad je možné vidieť granulomatózne poškodenie pečene v oblasti brucha.
U pacientov s terciárnym syfilisom sa môže prejaviť dilatácia aorty. Lineárna kalcifikácia pozdĺž aorty naznačuje syfilitickú aortitídu.